绵羊多核绒毛膜滋养层细胞的培养纯化及生长的研究

发布时间：2021-07-09 08:27

　　绵羊多核绒毛膜滋养层细胞来源于胎盘合体滋养层,位于母胎界面,大部分位于胎盘子叶中,其功能主要是转移和运输胎儿所需的营养物质、进行气体交换、分泌多种激素,并保护胎儿免受母体免疫系统的损伤。体外培养得到较高纯度的绵羊多核绒毛膜滋养层细胞可以为后续细胞转染、细胞生长研究和细胞生物学特性测定等试验提供细胞学基础,可为研究病毒与宿主的互作提供细胞学基础。本试验选取妊娠中期的绵羊胎盘子叶作为取样部位,采用胰蛋白酶和胶原酶两步消化法分离培养细胞,通过倒置相差显微镜观察滋养层细胞的形态学特点,应用常规HE染色和免疫组织化学染色法,透射电子显微镜技术对绵羊多核绒毛膜滋养层细胞进行鉴定。倒置相差显微镜下,滋养层细胞为双核及多核细胞,细胞形态为上皮样细胞,呈片状铺展生长。常规HE染色结果表明胎盘子叶部位存在大量多核滋养层细胞,培养的滋养层细胞出现双核及多核现象；对胎盘子叶与培养的滋养层细胞用细胞角蛋白7（CK7）进行免疫组织化学染色,胎盘子叶多核滋养层细胞与培养的滋养层细胞胞质区域结果均为棕色阳性信号；利用透射电镜技术,在电镜下可见滋养层细胞表面微绒毛发达,胞质内有较多膜包小泡及丰富的微丝和脂滴。本试验应用... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：43 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

结缔纸毛膜型胎盘

(cotyledonary placenta ),绒毛膜上的绒毛集合成群，称为线毛叶或子叶(cotyledon)。母体子宫内形成的子宫肉阜（亦称母体子叶）（图2)与城毛叶相对应，子宫肉阜处上皮被侵烛，使绒毛叶上皮直接和子宫内膜的结缔组织接触，共同形成胎盘突图2绵羊胎盘及子叶位置Fig2 The posit ion of sheep placenta and cotyledons域毛膜的滋养层细胞在妊娠中期可分成两种类型：合体滋养层细胞和细胞滋养层细胞。细胞滋养层细胞有丝分裂活跃，形成新的滋养层细胞，新滋养层细胞膜消失，融合形成合体滋养层细胞。在合体滋养层内不久出现一些小的腔隙，称滋养层陷窝，并相互连通成网。接着合体滋养层侵烛子宫内膜中充满母体血液的血窦壁，使陷窝、血窦相通，母体血进入陷窝，流经滋养层，子宫胎盘循环建立1.1.2绵羊绒毛膜、合体滋养层细胞和胎盘的生理功能■ 域毛膜的生理功能十分重要。域毛膜是浸浴在纸毛间隙的母液中的，从母血中吸收02和营养物质，并排出C02和代谢废物。级毛膜还有重要的内分泌功能

图5稀释的Percol丨分层液的分层现象及细胞与亚细胞图示（摘自Margaret G, et al. 2006) Schematic representation of expected locations of diluted Percoll solutions and cell types (From Margaret al. 2006)动物细胞冷冻保存.1冷冻保存的主要目的动物细胞冷冻保存的主要目的是保存种子细胞，以便随时取用。同时，冷细胞长期保存的最好方法，有利于减少细胞被微生物污染和细胞之间交叉险，减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变以及避免有限细胞老或恶性转化。大多数无特别的要求的细胞，都可冷冻保存于-i3(rc以下。动物细胞冷冻保存，为细胞培养工作带来很大的机动灵活性，降低了人及财力的消耗。.2冷冻保存要点当含细胞的悬浮液温度低于凝固点时，冰晶幵始形成，溶质浓度也相对地

【参考文献】：
期刊论文
[1]绵羊多核绒毛膜滋养层细胞的分离培养与鉴定[J]. 王专家,张宇飞,刘淑英.  细胞与分子免疫学杂志. 2014(01)
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[3]绵羊胎盘滋养层细胞的体外培养与鉴定[J]. 刘慧,刘淑英,刘丽珍,张宇飞.  中国兽医科学. 2012(03)



本文编号：3273399