蓝舌病病毒8型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
发布时间：2021-07-09 10:09
根据蓝舌病病毒8型（BTV-8） VP2基因序列（Seg-2）设计特异性引物和探针,建立了BTV-8实时荧光定量RT-PCR（RT-qPCR）检测方法。结果表明该法特异性强,能准确检测BTV-8核酸,与蓝舌病病毒其他血清型病毒、鹿流行性出血热病毒（EHDV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、口蹄疫病毒（FMDV）等病原核酸无交叉反应;最低可检测核酸浓度为2.8×103 copies/mL;Ct值组内和组间变异系数（CV）均小于2%。用所建立方法对115份临床样品进行检测,结果均为阴性,与文献报道的方法检测结果一致。建立的RT-qPCR方法可用于BTV-8的临床检测和流行病学调查。
【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(08)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
RT-qPCR特异性检测结果
将10倍梯度稀释的质粒标准品(浓度:2.8×109 copies/mL～2.8×104 copies/mL)进行RT-qPCR检测,每个浓度做3个重复,得到扩增曲线(图2)和标准曲线(图3)。ABI 7500 Fast System SDS software V1.4软件绘制的标准曲线斜率(slope)为-3.639,截距(intercept)为49.806,相关系数(R2)为0.998,各稀释度间呈良好线性关系。得到标准曲线方程为:y=-3.639x+49.806。对所检测样品进行定量时,可将样品Ct值代入方程,计算出样品的拷贝数。图3 RT-qPCR标准曲线
RT-qPCR标准曲线
【参考文献】：
期刊论文
[1]蓝舌病病毒和流行性出血病病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 杨振兴,朱建波,李占鸿,李卓然,何于雯,谢佳芮,李华春,廖德芳,杨恒. 中国兽医科学. 2019(09)
本文编号：3273547
【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(08)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
RT-qPCR特异性检测结果
将10倍梯度稀释的质粒标准品(浓度:2.8×109 copies/mL～2.8×104 copies/mL)进行RT-qPCR检测,每个浓度做3个重复,得到扩增曲线(图2)和标准曲线(图3)。ABI 7500 Fast System SDS software V1.4软件绘制的标准曲线斜率(slope)为-3.639,截距(intercept)为49.806,相关系数(R2)为0.998,各稀释度间呈良好线性关系。得到标准曲线方程为:y=-3.639x+49.806。对所检测样品进行定量时,可将样品Ct值代入方程,计算出样品的拷贝数。图3 RT-qPCR标准曲线
RT-qPCR标准曲线
【参考文献】：
期刊论文
[1]蓝舌病病毒和流行性出血病病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 杨振兴,朱建波,李占鸿,李卓然,何于雯,谢佳芮,李华春,廖德芳,杨恒. 中国兽医科学. 2019(09)
本文编号：3273547
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3273547.html
