硒通过TrxR1/MAPK信号通路缓解奶牛乳腺上皮细胞氧化应激的机理研究

发布时间：2021-07-10 05:37

　　围产期和泌乳前期的高产奶牛由于生理的变化和高的代谢水平,抗氧化功能显著降低,容易诱发氧化应激,导致疾病易感性增加。奶牛乳腺上皮细胞（BMEC）是乳脂和乳蛋白合成与分泌的重要场所,其细胞的生物合成能力决定了奶牛乳腺的产奶能力。因此,深入研究硒（Se）减缓BMEC氧化应激的机理对科学合理的补加Se,缓解奶牛氧化应激,优化奶牛抗氧化防御能力具有重要的理论与实际意义。本论文以BMEC为细胞模型,分别以外源性一氧化氮（NO）诱导细胞氧化损伤、以二硝基氯苯（DNCB）抑制硫氧还蛋白还原酶（TrxR）活性并诱导细胞氧化损伤、以白介素1受体拮抗剂（IL-1Ra）抑制白介素-1（IL-1）生物活性、以丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路抑制剂抑制其磷酸化水平、并结合过表达技术对TrxR1进行过表达,从TrxR1/MAPK/NO途径深入研究了 Se缓解BMEC氧化损伤的可能机制。本论文共分为6个试验。试验1采用单因子完全随机试验设计,研究不同剂量的Se（0、10、20、50、100、150、200 nmol/L）对BMEC抗氧化功能的调节作用,初探正常生理条件下Se对TrxR活性和NO合成的影响,为进一步探... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：187 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图２?研究技术路线??Ｆｉｇ．２?Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ?ｆｌｏｗｃｈａｒｔ?ｏｆ?ｓｔｕｄｙ??

?内蒙古农业大学博士学位论文?２９??ＤＬ?１０００，检测ＰＣＲ产物分子量大小，详见图３。进一步将ＰＣＲ产物送往上海生工??技术服务有限公司进行序列分析。??表３实时荧光定量ＰＣＲ体系??Ｔａｂｌｅ．?３?Ｒｅａｌ?ｔｉｍｅ?ＰＣＲ?ｓｙｓｔｅｍ??反应体系组成?终浓度?体积??Ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｓｙｓｔｅｍ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ?Ｆｉｎａｌ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?Ｖｏｌｕｍｅ?（ｇＬ）??ＳＹＢＹＰｒｅｍｉｘ?Ｅｘ?Ｔａｑ？?ｌｘ?１０??ＰＣＲ?Ｆｏｒｗａｒｄ?Ｐｒｉｍｅｒ?（１?ＯｊｉＭ）?０．２｜ｉＭ?０．４??ＰＣＲ?Ｒｅｖｅｒｓｅ?Ｐｒｉｍｅｒ?（１?Ｏ＾ｉＭ）?０．２｜ｉＭ?０．４??ｃＤＮＡ?２??ＲＮａｓｅ?Ｆｒｅｅ?Ｈ２０?７．２??Ｔｏｔａｌ?２０??表４实时荧光定量ＰＣＲ反应??Ｔａｂｌｅ．４?Ｒｅａｌ?ｔｉｍｅ?ＰＣＲ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??反应?温度?时间Ｘ循环??Ｒｅａｃｔｉｏｎ?Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ＴｉｍｅｘＣｙｃｌｅｓ??预变性?９５．０°Ｃ?３０ｓ??变性?９５．０°Ｃ?３０ｓ??退火?６０．０－Ｃ?３０ｓ?ｘ４０??延伸?７２．０＊Ｃ?２０ｓ??终延伸?７０．（ＴＣ?０．０６ｓ?ｘ５１??图３琼脂糖凝胶电泳鉴定不同目的基因的ＲＴ－ｑＰＣＲ产物??Ｆｉｇ．?３?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＲＴ－ｑＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｆｏｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔａｒｇｅｔ?ｇｅｎｅｓ??

?内蒙古农业大学博士学位论文?４３??－＾―?２ｈ???〇■…４１ｉ??—＾—６ｈ??１００－?□……８ｈ??Ｉ?；??＾６〇－??５０－?、．、？＇??．?？、，＇采?????＾??４０?－?＊?Ｉ?－＊??３０?Ｊ?，?，?，?，???，?，?，?，?，?，?，?，?，??０?２５０?５００?７５０?１０００?１２５０?１５００??ＮＯ添加水平〇ｉｍｏｌ／Ｌ）??图４?ＮＯ浓度及作用时间对ＢＭＥＣ相对增殖率的影响（％）??Ｆｉｇ．４?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ａｎｄ?ａｃｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ?ｏｆ?ＮＯ?ｏｎ?ＲＧＲ?（％）??２．２．３．２?ＮＯ处理对抗氧化酶活性及ＭＤＡ含量的影响??由表９和图５可以看出，与ＣＯＮ组相比，所有ＮＯ处理组的细胞ＳＯＤ活性均显??著降低（Ｐ＜〇．〇〇〇ｌ?）。其中，浓度为１２５０、１５００?ｐｍｏｌ／Ｌ的ＮＯ处理组ＳＯＤ活性较低，??显著低于２５０、５００和７５０?ｐｍｏｌ／Ｌ处理组，但与１０００?ｐｍｏｌ／Ｌ处理组无显著差异（尸??＞０．１０）；?１０００?ｐｍｏｌ／Ｌ处理组显著低于２５０、５００?ｎｍ〇ｌ／Ｌ处理组。与ＣＯＮ相比，除??２５０?ｐｍｏｌ／Ｌ处理组夕卜，其余各Ｎ？处理组的ＣＡＴ活性均显著低于ＣＯＮ（Ｐ＜０．０００１?），??其中，浓度为１０００、１２５０、１５００?ｐｍｏｌ／Ｌ的ＮＯ处理组ＣＡＴ活性间无显著差异，且显??著低于其余各组，尤以１５００＾ｍ〇ｌ／Ｌ处理组最低。细胞中ＧＰｘ活性也呈现相似的变化??规律。相反地，ＭＤＡ含量则呈现相反的变化规律，与ＣＯＮ相比，２５０、５００、７５０叫ｎｏｌ／Ｌ??

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本文编号：3275296