IRF-1调控IFP35表达及抑制BFV复制作用机制初探

发布时间：2021-07-12 06:07

　　干扰素调节因子（IRFs）和核因子κB （NF-κB）是细胞中两类重要的转录因子,对于细胞的先天免疫应答至关重要。目前在人的细胞中共发现了9个IRFs,即IRF-1到IRF-9。其中,IRF-1是首个被发现的IRFs家族成员,其靶蛋白参与了细胞内多种生物学功能的调控,包括抗病毒、抗增殖及细胞凋亡等。NF-κB能够调控干扰素-p、炎症因子以及白介素等基因的表达,在细胞的免疫应答及炎症反应中发挥着重要的作用。泡沫病毒（FVs）是一类特殊的反转录病毒,与其他反转录病毒相比,FVs的转录调控机制及生活周期具有诸多独特之处。FVs在体外培养的细胞中能够引起强烈的细胞病变,在其天然宿主中却处于潜伏感染状态,并不引发任何症状。目前关于FVs处于潜伏感染状态的具体机制尚不清楚。本室前期研究发现牛泡沫病毒（BFV）通过激活HeLa细胞的NF-κB通路上调了RelB的表达,RelB作为BFV反式激活因子BTas的辅因子增强了BTas介导的对LTR的反式激活作用,进而促进了BFV的复制。然而,NF-κB的激活并不能使BFV由潜伏感染状态向裂解感染状态转换,推测BFV有可能通过NF-κB激活了其他抗病毒因子。... 

【文章来源】：南开大学天津市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
目录
第一章 引言
    第一节 泡沫病毒
        1.1.1 泡沫病毒的基本生物学特征
        1.1.2 泡沫病毒的基因表达调控
            1.1.2.1 泡沫病毒反式激活因子Tas概述
            1.1.2.2 泡沫病毒基因表达时序模型
        1.1.3 泡沫病毒的宿主范围及致病性
    第二节 病毒及其诱导的先天免疫应答
        1.2.1 病毒诱导干扰素和炎症因子产生的机制
            1.2.1.1 宿主模式识别受体(PRR)介导的信号通路
            1.2.1.2 干扰素调节因子家族(IRFs)
                1.2.1.2.1 IRF-1概述
                    1.2.1.2.1.1 IRF-1的表达及活性调节
                    1.2.1.2.1.2 IRF-1与病毒的相互作用
                    1.2.1.2.1.3 IRF-1的其他功能
                1.2.1.2.2 IRF-2概述
                1.2.1.2.3 其他IRFs概述
            1.2.1.3 细胞的NF-κB信号通路
                1.2.1.3.1 NF-κB信号通路概述
                1.2.1.3.2 NF-κB的经典和非经典通路
        1.2.2 干扰素的抗病毒活性
            1.2.2.1 干扰素介导ISGs产生的信号通路
            1.2.2.2 干扰素诱导蛋白(ISGs)
        1.2.3 泡沫病毒与宿主先天免疫系统
            1.2.3.1 FV与NF-κB信号通路
            1.2.3.2 FV与干扰素
            1.2.3.3 FV与干扰素诱导蛋白
        1.2.4 IFP35概述
            1.2.4.1 IFP35的结构与主要功能
            1.2.4.2 IFP35的表达调控
            1.2.4.3 IFP35具有抑制BFV复制的作用
        1.2.5 小结
    第三节 本研究的目的和意义
        1.3.1 本研究的前期基础
        1.3.2 本研究的目的和意义
第二章 材料与方法
    第一节 实验材料
        2.1.1 细胞
        2.1.2 菌株
        2.1.3 质粒
        2.1.4 主要试剂
    第二节 实验方法
        2.2.1 基因操作
        2.2.2 蛋白的表达纯化
        2.2.3 细胞培养
        2.2.4 细胞转染
        2.2.5 蛋白质SDS-PAGE电泳
        2.2.6 Western Blot
        2.2.7 荧光素酶活性测定
        2.2.8 BFV指示细胞系分析
        2.2.9 5'-cDNA末端快速扩增分析
        2.2.10 染色质免疫共沉淀
        2.2.11 电泳迁移率阻滞实验
        2.2.12 RNA提取及反转录
        2.2.13 实时定量PCR
第三章 结果
    第一节 IRF-1介导干扰素对IFP35的诱导表达
        3.1.1 IFP35转录起始位点及启动子活性分析
        3.1.2 Ⅰ型和Ⅱ型干扰素通过ISRE激活了IFP35的启动子
            3.1.2.1 ISRE介导了Ⅰ型干扰素对IFP35启动子的激活
            3.1.2.2 ISRE介导了Ⅱ型干扰素对IFP35启动子的激活
        3.1.3 IRF-1通过ISRE激活了IFP35的表达
            3.1.3.1 IRF-1可以激活IFP35的启动子
            3.1.3.2 IRF-1通过ISRE激活IFP35的表达
        3.1.4 IRF-1参与了Ⅰ型干扰素对IFP35的激活
        3.1.5 IRF-1参与了Ⅱ型干扰素对IFP35的激活
            3.1.5.1 IFN-γ对IFP35的激活需要IRF-1
            3.1.5.2 在IFN-γ的刺激下,IRF-1可以结合在IFP35的启动子上
            3.1.5.3 IFN-γ通过STAT-1/IRF-1通路激活IFP35的表达
        3.1.6 IRF-1参与了NIK对IFP35的激活
        3.1.7 IRF-2、组成活化型的IRF-3及IRF-7可以激活IFP35的表达
    第二节 IRF-1抑制BFV复制
        3.2.1 BFV感染可诱导IRF-1表达
            3.2.1.1 BFV感染导致IRF-1表达上调
            3.2.1.2 BTas通过NF-κB通路激活IRF-1的表达
        3.2.2 IRF-1抑制BFV复制
            3.2.2.1 IRF-1可抑制BFV复制
            3.2.2.2 IRF-1可抑制BFV基因的转录
            3.2.2.3 IRF-1抑制BFV复制效应基因初探
第四章 讨论
    第一节 IFP35表达调控及其与BFV感染的关系
        4.1.1 IFP35启动子顺式作用元件分析
        4.1.2 IRFs激活IFP35的表达分析
        4.1.3 BFV感染不影响HeLa细胞内源IFP35表达的可能原因
    第二节 IRF-1与BFV感染的博弈
        4.2.1 BFV激活IRF-1表达
        4.2.2 IRF-1在宿主抑制BFV复制中的贡献
第五章 结论与展望
    第一节 结论
    第二节 展望
参考文献
致谢
附录1 英文缩写
附录2 个人简历
附录3 在学期间发表的论文与研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]牛泡沫病毒调节蛋白功能及其在LTR上应答元件的研究[J]. 刘佳建,王世珍,张莉,乔文涛,陈启民,耿运琪.  病毒学报. 2000(02)
[2]Borf-1蛋白是牛泡沫病毒的反式激活因子[J]. 刘佳建,刘淑红,陈启民,耿运琪.  科学通报. 1999(08)
[3]牛泡沫病毒（BSV）3026毒株的分离及分子生物学鉴定[J]. 刘淑红,陈荷新,陈家童,梁栋,陈启民,耿运琪,Ｗｏｏｄ.Ｃ．.  病毒学报. 1997(02)



本文编号：3279365