IGFs基因沉默对梅花鹿鹿茸软骨及间充质细胞生长发育的作用机制研究

发布时间：2021-07-16 12:10

　　本研究以RNAi-Ready pSIREN-RetroQZsGreen plasmid为载体,以IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ作为候选基因研究其对鹿茸生长的作用机制,针对候选基因各构建三个RNAi重组质粒,分别命名为pshRNA1-1、pshRNAl-2、pshRNA1-3和pshRNA2-1、 pshRNA2-2、pshRNA2-3,转染至软骨细胞及间充质细胞。应用Real-Time PCR和Western blot技术,对转染48h后的RNAi效果进行分析,筛选得到抑制效果最好的干扰组。用于研究目的基因对鹿茸软骨细胞及间充质细胞增殖、凋亡、周期及自身mRNA和蛋白表达的作用,探讨鹿茸生长调节机制。研究内容和结果如下：（1）所构建的三个IGF-Ⅰ RNAi质粒均可显著降低鹿茸软骨细胞及间充质细胞目的基因的表达量。其中,pshRNA1-1、pshRNA1-2. pshRNA1-3分别降低了IGF-Ⅰ的mRNA和蛋白表达水平,且pshRNAl-2的干扰效果最好,对IGF1mRNA的抑制率达到60%以上。（2）所构建的三个IGF-ⅡRNAi质粒均可显著降低鹿茸软骨细胞及间充质细胞目的基因的表达量。... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表(Abbreviation words)
1 前言
    1.1 梅花鹿的概述
        1.1.1 概述
        1.1.2 鹿茸的化学成分
    1.2 IGF-Ⅰ的研究概况
        1.2.1 IGF-Ⅰ的结构
        1.2.2 IGF-Ⅰ的作用机理及与鹿茸生长的研究
    1.3 IGF-Ⅱ研究概况
        1.3.1 IGF-Ⅱ的结构
        1.3.2 IGFs受体和结合蛋白
        1.3.3 IGF-Ⅱ的生理功能与鹿茸生长的研究
    1.4 RNA干扰技术研究概况
        1.4.1 RNAi的基本概念
        1.4.2 分子机制
        1.4.3 siRNA导入哺乳动物体内的方法
    1.5 RNAi技术及其应用
        1.5.1 基因功能的研究
        1.5.2 转基因动物的研究
        1.5.3 抗病毒作用
        1.5.4 抗肿瘤作用
        1.5.5 药物开发
        1.5.6 研究信号传导的新途径
    1.6 RNAi技术的应用前景
    1.7 研究目的与意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 样本采集
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 干扰载体
        2.1.4 主要试剂
        2.1.5 主要溶液及相关缓冲液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 鹿茸软骨细胞及其间充质细胞的分离和培养
        2.2.2 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基因RNAi重组干扰质粒构建
        2.2.3 重组质粒克隆及提取
        2.2.4 重组质粒转染鹿茸软骨细胞和间充质细胞
        2.2.5 实时荧光定量PCR(QPCR)
        2.2.6 转染后软骨及间充质细胞相关蛋白的Western blot分析
        2.2.7 转染后软骨及间充质细胞增殖检测
        2.2.8 转染后软骨及间充质细胞凋亡检测
        2.2.9 转染后软骨及间充质细胞周期检测
    2.3 统计分析
3 结果与分析
    3.1 重组质粒的构建及其鉴定
    3.2 重组质粒转染软骨及间充质细胞的转染效果检测
    3.3 细胞总RNA的检测
    3.4 重组质粒的效果鉴定
    3.5 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ沉默抑制软骨及间充质细胞增殖
    3.6 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ沉默诱导软骨及间充质细胞凋亡
    3.7 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ沉默影响软骨及间充质细胞周期
4 讨论
    4.1 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ对软骨细胞及间充质细胞生长发育的影响
    4.2 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ对软骨细胞及间充质细胞生长周期的影响
    4.3 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ引起软骨细胞及间充质细胞凋亡的作用机制
5 小结
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]鹿茸药理作用的研究进展[J]. 吴瑕,常洋,何剑斌.  畜禽业. 2008(12)
[2]东北马鹿鹿茸软骨组织cDNA文库构建及IGF2基因克隆与结构分析[J]. 刘学东,张子栋,郑冬,马建章.  中国农业科学. 2008(09)
[3]“中国鹿乡”期待新辉煌[J]. 张宪法.  当代畜禽养殖业. 2008(08)
[4]鹿茸发育研究进展[J]. 鲍加荣,杨福合,荣敏,李春义.  特产研究. 2008(02)
[5]IGF1对生长30d鹿茸的体外培养鹿茸生长中心干细胞的影响[J]. 冯海华,赵丽红,闭兴明,李光凤,岳占碰,李春义,邓旭明.  中国农学通报. 2008(02)
[6]胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）研究进展[J]. 孟祥伟,张焱如,芒来.  内蒙古农业科技. 2007(06)
[7]胰岛素样生长因子系统的研究进展[J]. 薛慧良.  生物学教学. 2007(11)
[8]胰岛素样生长因子的研究进展[J]. 朱红杰,张彦华,张亿虹,闫玉清.  黑龙江医药. 2007(03)
[9]胰岛素样生长因子与动物性状的相关性研究[J]. 梁艳,李学伟.  畜禽业. 2006(12)
[10]马鹿茸不同部位IGF-1含量的比较分析[J]. 郝林琳,刘松财,任晓慧,戴建威,王伟,张永亮.  经济动物学报. 2005(04)

博士论文
[1]梅花鹿、马鹿营养、血清IGF-1浓度及鹿茸生长规律研究[D]. 李光玉.中国农业科学院 2005

硕士论文
[1]鸡胚胎外周IGFs水平变化规律及IGF-2基因多态性与中后期发育关联性的研究[D]. 郭春燕.扬州大学 2007
[2]吉林白鹅IGFⅡ基因SNP及其与肉用性状相关性的研究[D]. 徐晶.吉林农业大学 2007



本文编号：3286983