猪胸膜肺炎放线杆菌重组NLPI蛋白诱导小鼠的免疫保护力研究

发布时间：2021-07-16 17:21

　　以肺部纤维化和出血性坏死为主要特征的猪传染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumonia,PCP）是一种对养猪业影响巨大的呼吸道疾病,由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）感染引起探究其感染肺部致病的分子细胞机制,发现目前市场上的疫苗保护效果不佳,因此寻找新的疫苗候选分子具有重要意义。宿主在细菌感染后,会引起体内细胞因子等产生重要变化,从而调节机体的获得性免疫,该研究结果对于疫苗的。为了了解小鼠在APP感染后,细胞因子等的变化,进行了本研究。APP滴鼻感染小鼠,48h后尸检或宰杀动物,取肺部组织,一部分利用HE染色法观察肺组织病变,一部分用于Q-PCR方法检测干扰素调节因子家族（Interferon regulatory factor,IRF）、白介素（Interleukin,IL）因子、toll样受体（Toll-like receptor,TLR）、肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）等相关因子的表达量变化情况。结果显示,感染APP后小鼠表现出呼吸困难... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
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第一章 前言
    1.猪胸膜肺炎放线杆菌
    2.流行病学
    3.发病机制
        3.1 临床症状和病理变化
        3.2 致病机制
        3.3 APP毒力因子及致病性
            3.3.1 APP的溶血外毒素(Apx)
            3.3.2 脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)
            3.3.3 菌毛(Fimbriae)
            3.3.4 荚膜多糖
            3.3.5 外膜蛋白(Outer membrane proteins,OMP)
            3.3.6 转铁结合蛋白(Transfer rinbinding peptides,TBP)
    4.诊断
        4.1 常规镜检与病原学诊断
        4.2 血清学诊断方法
        4.3 分子生物学诊断技术
    5.疫苗的研究现状
        5.1 灭活疫苗
        5.2 弱毒活疫苗
        5.3 亚单位疫苗
        5.4 基因工程苗
    6.目的和意义
第二章 TLR/NLRs/IRF信号通路在APP感染致小鼠肺部病变中的作用
    1.材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌种和实验动物
            1.1.2 培养基
            1.1.3 试剂
        1.2 方法
            1.2.1 APP培养与小鼠模型建立
            1.2.2 组织石蜡切片的制备
            1.2.3 切片染色
            1.2.4 引物设计
            1.2.5 荧光定量PCR
            1.2.6 计算方法
    2.结果与分析
        2.1 剖检和组织病理学观察
        2.2 细胞因子在小鼠肺部表达水平
        2.3 感染APP小鼠肺部TLR家族表达水平
        2.4 小鼠感染APP后 IRF家族在肺部表达量
        2.5 感染APP后小鼠肺部细胞因子表达量
    3.讨论
第三章 猪胸膜肺炎放线杆菌nlpi基因的克隆和分析
    1.材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌种、质粒和培养基
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 引物设计
        1.2 方法
            1.2.1 菌株复苏和培养
            1.2.2 APP nlpi基因的克隆
            1.2.3 APP nlpi基因分析
    2.结果与分析
        2.1 APP nlpi基因克隆
        2.2 APP nlpi 的进化分析
        2.3 APP nlpi的结构和功能分析
        2.4 APP NLPI与细菌细胞分裂相关蛋白的相互作用分析
        2.5 与APP NLPI相互作用猪的细胞膜表面PDZ结构域蛋白的分析
    3.讨论
第四章 重组猪胸膜肺炎放线杆菌NLPI蛋白诱导小鼠抗攻击感染的免疫保护力研究
    1.材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌株、质粒和培养基
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 引物设计
        1.2 方法
            1.2.1 APP扩增
            1.2.2 APP nlpi基因的克隆
            1.2.3 APP nlpi基因分析
            1.2.4 p ET-nlpi重组表达载体的构建
            1.2.5 重组NLPI蛋白(recombinant NLPI,r NLPI)的诱导表达及纯化
            1.2.6 rNLPI的 Western-blot鉴定
            1.2.7 免疫保护试验
            1.2.8 数据处理与分析
    2.结果与分析
        2.1 APP nlpi基因克隆
        2.2 APP nlpi的进化分析
        2.3 APP nlpi的结构和功能分析
        2.4 重组质粒p ET-nlpi的构建和r NLPI蛋白的检测
        2.5 r NLPI的表达和免疫原性鉴定
        2.6 r NLPI免疫保护试验诱导小鼠产生的血清抗体水平
        2.7 抗攻击感染的免疫保护效果观察
    3.讨论
第五章 结论与创新
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
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[2]猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡA基因原核表达及其免疫原性研究[D]. 周家强.四川农业大学 2013
[3]胸膜肺炎放线杆菌毒素蛋白的克隆表达及多重荧光PCR诊断方法的研究[D]. 黄琦.广西大学 2008
[4]周口市猪传染性胸膜肺炎流行病学调查与防治试验[D]. 王伟.华中农业大学 2008



本文编号：3287428