催乳素对奶牛乳腺干细胞体外增殖和分化的影响
发布时间：2021-07-17 12:02
荷斯坦奶牛（Holstein）具有体格健壮,适应性强,产奶量大等特点,在我国的大部分地区均有饲养。为增加其产奶量,一种小分子多肽性激素——催乳素（Prolactin,PRL）被应用到奶牛催乳过程中。本实验主要研究PRL对体外培养的乳腺干细胞的增殖及分化影响。首先利用机械获取法纯化实验室已分离的乳腺干细胞,再通过诱导分化和标记基因检测的方法进行鉴定。其次选择不同浓度PRL刺激乳腺干细胞,通过MTT法和RealtimePCR研究体外PRL对乳腺干细胞促进增殖和分化的最适浓度。研究结果如下:1.对机械获取法纯化的乳腺干细胞诱导,证明其具有分化成骨髓细胞、脂肪细胞、神经细胞的多潜能性,能够表达多种干性基因。2.用0、100、300、500、700 ng/mL五个浓度的PRL对乳腺干细胞进行处理,经过MTT法研究分析,500ng/m L PRL对体外乳腺干细胞具有最适增殖作用。3.用0 ng/mL、100 ng/mL、300 ng/m L、500 ng/mL、700 ng/mL五个浓度的PRL刺激乳腺干细胞,分别在0 d、1 d、3 d、5 d、7 d、9 d、11 d和14 d提取细胞总RNA...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
乳腺干细胞壁龛假设模式图
in 信号通路是机体发育、器官成熟和细胞生长的关键调控通路[1现，Wnt/β-catenin 信号通路的作用靶点细胞，极可能是乳腺干细量 Wnt 蛋白表达，会导致乳腺癌细胞中存在干细胞信号标记[1乳腺干细胞增殖紊乱[19]。β-catenin 是 Wnt 信号通路的关键蛋白的实验表明加强β-catenin 细胞内含量，可以增加干细胞在机体组发现阻断β-catenin 在乳腺细胞中表达，能停止乳腺发育，β-c胞存活因子。路中的 Notch 是一种保守膜蛋白，有促进细胞分裂的作用[24入细胞核，下游相关信号启动，细胞生长分化随之受其影响。Doh受体在乳腺干细胞中合成表达剧烈，而在其分化的上皮细胞中到乳腺干细胞的 1/4~1/2。Notch 信号失调常发生在乳腺癌细胞号通路是机体组织器官生长发育调节信号网络中的常见信号通图 2 乳腺干细胞增值和分化可能相关的途径[15]Fig 2 Ways of self-renewal and differentiation of MSCs may be involved[15]
操作过程中，为防止局部解冻不均匀造成温差导致细胞活性受到影动水槽中的冻存管，使其受热均匀。解冻后细胞放入超净台中操作。第00 rpm 离心 5 min；第二步弃上清，勿触及底部沉淀；第三步重悬细胞损伤细胞;第四步，以适当的细胞量接种于培养皿中。腺干细胞的纯化与传代培养细胞贴壁 48h 后，显微镜下观察细胞形态，用机械刮除法去除杂质细胞记号笔标记干细胞区域，用细胞挂刷或枪头小心刮除未标记区域。可以到细胞表型单一，换液继续培养。乳腺干细胞在培养皿中长到 60％~70％汇合时，掉弃上清培养基，用加缓冲液清洗两遍，然后加入 0.25％的胰蛋白酶将细胞消化，当大部分细，加等体积基础培养基终止消化，用移液器将消化的细胞加入离心管 1 min，重悬，细胞计数。所得到的 P4 代细胞一部分扩增到 P5 代细胞，于下一步实验。1 2
【参考文献】：
期刊论文
[1]催乳素对奶牛乳腺上皮细胞乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响[J]. 邢媛媛,李大彪,李红磊,于永强,王卫云. 动物营养学报. 2016(08)
[2]乳腺发育的研究进展[J]. 安培培,郭倩倩,李春义. 中国畜牧兽医. 2015(09)
[3]多潜能乳腺干细胞的发现[J]. 王代松,蔡车国,董小兵,俞清,张晓鸥,杨力,曾艺. 中国细胞生物学学报. 2015(01)
[4]神经干细胞的干性维持机制[J]. 高海霞,金华君,钱其军. 中国组织工程研究. 2012(19)
[5]伊犁地区荷斯坦奶牛体尺体重及外貌评分对产奶量的影响[J]. 张浩,黄锡霞,热西提·阿布都热依木,余雄,柏开艳,努尔比亚·吾布力,于梦然. 新疆农业科学. 2010(12)
[6]表皮干细胞生物学特性研究现状[J]. 蓝蔚,刘德伍,毛远桂. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(25)
[7]成体干细胞[J]. 吴皖,陈建河,赵春华. 基础医学与临床. 2005(10)
[8]干细胞分化抗原及标记物研究进展[J]. 王明元. 国外医学(免疫学分册). 2004(06)
博士论文
[1]乳腺上皮细胞条件培养基对人脂肪干细胞增殖和上皮分化的影响[D]. 杨艳清.华中科技大学 2013
硕士论文
[1]针剌膻中、乳根、足三里治疗剖宫产术后缺乳的临床比较研究[D]. 王娜.新疆医科大学 2015
[2]TAⅡ小鼠自发乳腺癌肿瘤相关差异蛋白研究[D]. 朱悦.天津医科大学 2007
本文编号：3288141
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
乳腺干细胞壁龛假设模式图
in 信号通路是机体发育、器官成熟和细胞生长的关键调控通路[1现，Wnt/β-catenin 信号通路的作用靶点细胞，极可能是乳腺干细量 Wnt 蛋白表达，会导致乳腺癌细胞中存在干细胞信号标记[1乳腺干细胞增殖紊乱[19]。β-catenin 是 Wnt 信号通路的关键蛋白的实验表明加强β-catenin 细胞内含量，可以增加干细胞在机体组发现阻断β-catenin 在乳腺细胞中表达，能停止乳腺发育，β-c胞存活因子。路中的 Notch 是一种保守膜蛋白，有促进细胞分裂的作用[24入细胞核，下游相关信号启动，细胞生长分化随之受其影响。Doh受体在乳腺干细胞中合成表达剧烈，而在其分化的上皮细胞中到乳腺干细胞的 1/4~1/2。Notch 信号失调常发生在乳腺癌细胞号通路是机体组织器官生长发育调节信号网络中的常见信号通图 2 乳腺干细胞增值和分化可能相关的途径[15]Fig 2 Ways of self-renewal and differentiation of MSCs may be involved[15]
操作过程中，为防止局部解冻不均匀造成温差导致细胞活性受到影动水槽中的冻存管，使其受热均匀。解冻后细胞放入超净台中操作。第00 rpm 离心 5 min；第二步弃上清，勿触及底部沉淀；第三步重悬细胞损伤细胞;第四步，以适当的细胞量接种于培养皿中。腺干细胞的纯化与传代培养细胞贴壁 48h 后，显微镜下观察细胞形态，用机械刮除法去除杂质细胞记号笔标记干细胞区域，用细胞挂刷或枪头小心刮除未标记区域。可以到细胞表型单一，换液继续培养。乳腺干细胞在培养皿中长到 60％~70％汇合时，掉弃上清培养基，用加缓冲液清洗两遍，然后加入 0.25％的胰蛋白酶将细胞消化，当大部分细，加等体积基础培养基终止消化，用移液器将消化的细胞加入离心管 1 min，重悬，细胞计数。所得到的 P4 代细胞一部分扩增到 P5 代细胞，于下一步实验。1 2
【参考文献】：
期刊论文
[1]催乳素对奶牛乳腺上皮细胞乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响[J]. 邢媛媛,李大彪,李红磊,于永强,王卫云. 动物营养学报. 2016(08)
[2]乳腺发育的研究进展[J]. 安培培,郭倩倩,李春义. 中国畜牧兽医. 2015(09)
[3]多潜能乳腺干细胞的发现[J]. 王代松,蔡车国,董小兵,俞清,张晓鸥,杨力,曾艺. 中国细胞生物学学报. 2015(01)
[4]神经干细胞的干性维持机制[J]. 高海霞,金华君,钱其军. 中国组织工程研究. 2012(19)
[5]伊犁地区荷斯坦奶牛体尺体重及外貌评分对产奶量的影响[J]. 张浩,黄锡霞,热西提·阿布都热依木,余雄,柏开艳,努尔比亚·吾布力,于梦然. 新疆农业科学. 2010(12)
[6]表皮干细胞生物学特性研究现状[J]. 蓝蔚,刘德伍,毛远桂. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(25)
[7]成体干细胞[J]. 吴皖,陈建河,赵春华. 基础医学与临床. 2005(10)
[8]干细胞分化抗原及标记物研究进展[J]. 王明元. 国外医学(免疫学分册). 2004(06)
博士论文
[1]乳腺上皮细胞条件培养基对人脂肪干细胞增殖和上皮分化的影响[D]. 杨艳清.华中科技大学 2013
硕士论文
[1]针剌膻中、乳根、足三里治疗剖宫产术后缺乳的临床比较研究[D]. 王娜.新疆医科大学 2015
[2]TAⅡ小鼠自发乳腺癌肿瘤相关差异蛋白研究[D]. 朱悦.天津医科大学 2007
本文编号：3288141
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