重组葡萄球菌肠毒素对猪先天免疫功能的影响

发布时间：2021-07-17 13:17

　　葡萄球菌肠毒素（SEs）作为超抗原能促进淋巴细胞增殖，引起机体广泛的炎症反应。肠毒素作用迅速、产生炎症能力强，暗示其可能影响先天免疫应答机制介导适应性免疫，促进炎症的产生。Toll样受体（TLRs）作为先天免疫模式识别受体，在先天性早期抗感染、炎症反应及调节适应性免疫中有重要作用，但TLRs对葡萄球菌肠毒素刺激的应答反应尚不清楚。本文研究了重组葡萄球菌肠毒素对猪先天性免疫分子TLR转录表达、其介导的炎症因子表达的影响，以探讨肠毒素引发先天免疫应答的分子机制，主要研究结果如下：应用RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞中克隆了8种Toll样受体（TLR1、2、4、5、6、8、9、10）全基因，利用生物信息学技术分析其单核苷酸多态性（SNPs）和氨基酸功能区，预测TLR蛋白高级结构及其配体识别域，从结构角度分析突变氨基酸对TLR功能的影响。结果发现TLR基因序列具有个体差异性和种属特异性，其非同义突变主要位于胞外区，推测其病原识别具有多样性。预测的8种TLR分子均为I型跨膜蛋白，胞外区富含亮氨酸重复序列（LRRs）；二级结构主要由α-螺旋、β-折叠组成；TLR单体和二聚体分别为马蹄形和“M”形。... 

【文章来源】：天津大学天津市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 葡萄球菌肠毒素超抗原
        1.1.1 葡萄球菌肠毒素简介
        1.1.2 葡萄球菌肠毒的生物活性
        1.1.3 肠毒素超抗原作用的分子机制
        1.1.4 肠毒素的临床致病性
    1.2 先天免疫反应与获得性免疫的桥梁——Toll 样受体
        1.2.1 先天免疫模式识别受体
        1.2.2 Toll 样受体种类及其特异性配体
        1.2.3 Toll 样受体的结构
        1.2.4 Toll 样受体的信号传导途径
    1.3 葡萄球菌肠毒素引发的炎症反应
        1.3.1 肠毒素介导的先天免疫促炎反应
        1.3.2 肠毒素介导的先天-后天免疫及其致炎症作用
        1.3.3 肠毒素超抗原导致的炎症后果
    1.4 本课题的研究目的及意义
        1.4.1 研究目的、意义
        1.4.2 研究内容
第二章 猪先天免疫模式识别受体——Toll 样受体的克隆与分析
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 结果与分析
        2.3.1 RT-PCR 扩增结果及鉴定
        2.3.2 猪 Toll 样受体序列分析及关键结构域预测
        2.3.3 猪 Toll 样受体单核苷酸多态性分析
        2.3.4 猪 Toll 样受体氨基酸同源性及遗传演化分析
        2.3.5 猪 Toll 样受体高级结构预测
    2.4 讨论
        2.4.1 猪 TLRs 单核苷酸多态性（SNPs）与免疫
        2.4.2 猪 TLRs 结构与功能的关系
    2.5 小结
第三章 猪先天免疫相关分子荧光定量 PCR 检测方法的建立
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 荧光定量 PCR 的特异性分析
        3.3.2 荧光定量 PCR 的敏感性分析
        3.3.3 荧光定量 PCR 的重复性分析
        3.3.4 荧光定量 PCR 条件优化
        3.3.5 荧光定量 PCR 扩增曲线及溶解度曲线
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 重组葡萄球菌肠毒素对猪先天免疫相关分子转录表达的影响
    4.1 前言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
    4.3 结果与分析
        4.3.1 肠毒素促进 T 淋巴细胞增殖实验
        4.3.2 肠毒素体外刺激先天免疫相关分子 mRNA 的转录变化
        4.3.3 肠毒素对猪肠道炎症反应的影响
        4.3.4 肠毒素体内刺激实验
        4.3.5 肠毒素刺激炎症相关细胞因子表达的变化
    4.4 讨论
        4.4.1 重组肠毒素的先天促炎性作用
        4.4.2 重组肠毒素的超抗原活性
    4.5 小结
第五章 结论
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的调查分析[J]. 曹虹,王敏,郑荣,李先平,王芳,蒋云生,杨一芬.  南方医科大学学报. 2012(05)
[2]葡萄球菌肠毒素DAS-ELISA检测方法的建立及应用[J]. 刘鹏翀,黄金海,刘莉,刘莹,刘壮,孙盈.  食品科学. 2012(08)
[3]Polymorphisms of the TLR2 and TLR4 genes are associated with risk of gastric cancer in a Brazilian population[J]. Juliana Garcia de Oliveira,Ana Elizabete Silva.  World Journal of Gastroenterology. 2012(11)
[4]Toll样受体在鱼类中的研究进展[J]. 龙钟明,王利,苟小兰,刘港彪.  安徽农业科学. 2012(01)
[5]重组葡萄球菌肠毒素SEQ的生物活性及其结构关系分析[J]. 曾琳姣,黄金海,刘莹,庄世文,薛照辉.  华北农学报. 2010(05)
[6]食源性金黄色葡萄球菌流行特征、产肠毒素特性及耐药性研究[J]. 巢国祥,焦新安,周丽萍,周晓辉,朱炳炎.  中国卫生检验杂志. 2006(08)
[7]Toll样受体研究进展与胃肠疾病[J]. 郭秋莎,夏冰.  国外医学(消化系疾病分册). 2003(02)



本文编号：3288249