禽DNA病毒三重PCR检测方法的建立

发布时间：2021-07-20 01:04

　　为了建立可以同时检测4型禽腺病毒（FAdV-4）、传染性喉气管炎病毒（ILTV）、禽痘病毒（FPV）的方法,试验参考GenBank上登录的FAdV-4、ILTV、FPV的基因序列保守片段分别设计引物,优化PCR扩增体系和扩增程序,建立针对以上三种病毒的三重PCR检测方法,并考察方法的特异性、敏感性及对临床样品检测的准确性。结果表明:最终确定三重PCR最佳扩增体系（50μL）为,FADV-4、ILTV、FPV DNA各5μL,10×Buffer 5μL,dNTP Mix10μL,Mg²⁺5μL,Taq3μL,引物ILTV-R 0.4μL,ILTV-F 0.4μL,FPV-F 0.8μL,FPV-R 0.8μL,FAdV-R 1.8μL,FAdV-F 1.8μL,ddH₂O 6μL。三重PCR最佳扩增程序为95℃预变性5 min;95℃变性30 s,54℃退火30 s,72℃延伸1 min,共30个循环;72℃终延伸10 min;4℃结束反应。所建立的检测方法只能扩增FAdV-4、ILTV、FPV,而不能扩增鸡马立克病毒（MDV）、减蛋综合征病毒... 

【文章来源】：黑龙江畜牧兽医. 2020,(16)北大核心

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

引物添加比例优化结果

退火温度优化结果

根据引物浓度及退火温度优化结果,最终确定三重PCR最佳扩增体系(50 μL)为:FADV-4、ILTV、FPV DNA各5 μL,10×Buffer 5 μL,dNTP Mix10 μL,Mg2+5 μL,Taq酶3 μL,引物ILTV-R 0.4 μL,ILTV-F 0.4 μL,FPV-F 0.8 μL,FPV-R 0.8 μL,FAdV-R 1.8 μL,FAdV-F 1.8 μL,ddH2O 6 μL。三重PCR最佳扩增程序为:95 ℃预变性5 min;95 ℃变性30 s,54 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,共30个循环;72 ℃终延伸10 min;4 ℃结束反应。用上述程序扩增FAdV-4、FPV、ILTV核酸扩增结果与预期条带大小一致,见图3。3.2 特异性试验


本文编号：3291801