血清5型猪胸膜肺炎放线杆菌双基因ApxⅠC/ⅡC缺失株的构建研究

发布时间：2021-07-22 10:39

　　猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae, APP）是一种引起猪严重呼吸道症状的传染病病原菌,可以引发猪传染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumonia, PCP）;在近几年的文献报道中发现,研发主要毒力基因缺失的弱毒疫苗菌株已经成为了研究防治该病的主要方向。本试验以APP单基因缺失株SW1A Ⅱ C为亲本株,构建了同时缺失ApxⅠC以及ApxⅡC的双基因缺失突变株SW1ΔⅠC/ΔⅡC,并对其生物学特性和免疫原性进行相关研究。1、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌SW1ΔIC/ΔIIC的构建1.1同源重组载体pBOSKΔⅡC的构建设计引物以本实验室分离的APP血清5型SW1株基因组为模板扩增ApxⅡC基因上游2654bp和下游2039bp序列TA克隆至pMD19-T,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,通过SacⅠ、SaiⅠ位点酶切连接至载体pBS-OSK,作为其左、右同源臂,通过PCR和酶切鉴定,试验成功构建了缺失451bp的ApxⅡC基因的APP血清5型SW1株重组转移载体pBOSKΔⅡC。1.2 APP双基因ApxⅠ... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图８突变株ＳＷＩＡＩＣ／ＡＩＩＣ正向筛选的鉴定

鉴定结果可得，一条约为７〇〇ｂｐ左右条带（是含有完整ＡｐｘＩｌＣ的７３８ｂｐ条带）??和一条３００ｂｐ左右的条带（是缺失了?ＡｐｘＩＩＣ基因的上下游同源臂之间的片段），??该结果证明第一次同源重组正确（如图８）。??３．２．２?ＡＰＰ重组菌的负向筛选??将上一步骤筛选得到的重组苗液在无抗性的Ｔ泌培养基中扩大培养促进其??第二次同源重组，然后将菌液涂布于含有１０％薦糖的ＴＳＡ培养基中置于３７‘Ｃ恒??温培养箱中过夜培养，待平板上长出菌落，则对该苗落利用引物ＰＣ－１和ＰＣ－２进??行ＰＣＲ鉴定，结果得到一条大小约为３００ｂｐ左右的条带（单拷贝），征明ＰＣＲ??扩增结果与预期相符（如图９），并说明本实验成功构建突变株ＳＷ１Ａ?Ｉ?Ｃ／ＡＩＩＣ。??３４??

【参考文献】：
期刊论文
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[10]胸膜肺炎放线杆菌主要毒力因子的致病性及其免疫原性研究进展[J]. 王春来,杨旭夫,刘杰.  预防兽医学进展. 2001 (01)

博士论文
[1]胸膜肺炎放线杆菌毒素ApxIV的致病性及基因缺失弱毒疫苗的研究[D]. 刘金林.华中农业大学 2009
[2]猪胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ基因工程突变株构建及其生物学特性研究[D]. 贝为成.华中农业大学 2005

硕士论文
[1]嵌合Hps外膜蛋白P2基因的APP缺失突变株△apxIC/ompP2的构建及其生物学特性研究[D]. 龚雨恒.四川农业大学 2011



本文编号：3296995