玻璃化冷冻保存对猪卵母细胞影响的初步研究
发布时间：2021-07-23 06:27
为了探索对于猪不同时期卵母细胞毒性最低,冷冻效果最佳的冷冻保护液配方,寻找最适合猪不同时期卵母细胞的冷冻方法,分析猪不同时期卵母细胞冻后发育能力降低的影响因素,从而为成功冷冻猪卵母细胞能应用于生产实际提供理论支持。因此本研究以GV期和MⅡ期卵母细胞作为试验材料,应用玻璃化冷冻方法,就目前应用最多的七种冷冻保护液配方进行筛选,比较三种不同冷冻载体冷冻卵母细胞的效果差异,并通过透射电镜方法观察卵母细胞冷冻前后的超微结构变化,采用彗星电泳方法分析冷冻对卵母细胞造成的DNA损伤情况。结果发现：1.七组冷冻保护液对MⅡ期卵母细胞有低毒性作用,各组分裂率、囊胚率、囊胚细胞数均低于对照组,5组的分裂率与对照组差异显著（P<0.05）,1组的囊胚率与对照组差异显著（P<0.05）。其余各组间分裂率和囊胚率无统计学差异。综合各组指标选取3组、6组和7组为对猪MⅡ期卵母细胞的发育能力损伤最小的前三组冷冻保护液,应用GMP管对其冷冻保护效果进行比较,发现乙二醇单独使用或者乙二醇和二甲基亚砜混合使用都是适合MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的保护剂配方。综合考虑,选取HM+7.5%（DMSO+EG）,HM+...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
第一章 卵母细胞冻存研究概况
1 卵母细胞冷冻保存的意义及概况
2 低温冷冻的原理及损伤机理
3 玻璃化冷冻保护剂
3.1 渗透性保护剂
3.2 非渗透性保护剂
3.3 抗冻蛋白
3.4 纳米颗粒
3.5 新型抗冻保护剂
4 卵母细胞玻璃化冷冻保存方法及其影响
4.1 开放式拉长麦管法(Open pulled straw,OPS)
4.2 半麦管法(Hemi-straw)
4.3 毛细玻璃法(GMP)
4.4 电镜铜网法(electron microscopic grids)
4.5 冷冻环玻璃化法(Cryo-loop Vitrification,CLV)
4.6 固体表面冷冻法(Solid-Surface vitrification,SSV)
4.7 微滴法(Microdroplet,MDS)
5 冷冻对卵母细胞的影响及损伤检测方法
5.1 对超微结构的影响
5.2 对细胞骨架的影响
5.3 对透明带的影响
5.4 对DNA的影响
第二章 玻璃化冷冻保护液对不同时期卵母细胞发育能力的影响
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.3 试验设计
1.4 数据分析
2 结果
2.1 冷冻保护液对猪GV期、MⅡ期卵母细胞发育能力的影响
2.2 三种冷冻保护液对玻璃化冷冻GV期、MⅡ期卵母细胞发育能力的影响
2.3 三种冷冻载体对GV期、MⅡ期卵母细胞冷冻效果的影响
3 讨论
第三章 冷冻前后GV期及MⅡ期卵母细胞的超微结构观察
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.3 试验设计
2 结果
2.1 GV期卵母细胞超微结构观察
2.2 MⅡ期卵母细胞超微结构观察
2.3 玻璃化冷冻后GV期卵母细胞超微结构的变化
2.4 玻璃化冷冻后MⅡ期卵母细胞超微结构的变化
3 讨论
第四章 玻璃化冷冻对卵母细胞DNA的影响
1 材料和方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.3 试验设计
1.4 数据统计分析
2 结果
2.1 玻璃化冷冻对GV期卵母细胞DNA损伤的检测
2.2 玻璃化冷冻对MⅡ期卵母细胞DNA损伤的检测
3 讨论
第五章 结论
参考文献
图片与说明
致谢
作者简介
攻读学位期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]纳米颗粒对猪GV期卵母细胞低温保存效果的影响[J]. 李维杰,周新丽,刘宝林,戴建军,吕福扣,张德福,徐利. 中国生物医学工程学报. 2013(05)
[2]纳米颗粒对细胞亚结构的影响[J]. 薄洋,金承钰. 实验室研究与探索. 2013(10)
[3]纳米低温保护剂导热系数研究[J]. 唐临利,刘宝林,郝保同,刘连军. 制冷学报. 2013(04)
[4]玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞透明带超微结构变化及体外受精效果的影响[J]. 袁佃帅,莫显红,王亮,梁莹,朱士恩. 中国畜牧杂志. 2013(03)
[5]3种冷冻方法对猪MII期卵母细胞线粒体分布和损伤的影响[J]. 戴建军,吴彩凤,张廷宇,张树山,徐利,张德福. 畜牧兽医学报. 2012(10)
[6]玻璃化冷冻对猪MⅡ卵母细胞皮质颗粒分布及其激活后胚胎发育能力的影响[J]. 郑天威,傅祥伟,吴国权,贾宝瑜,朱士恩. 中国畜牧杂志. 2012(19)
[7]生物材料纳米低温保存技术研究进展[J]. 狄德瑞,何志祝,刘静. 化工学报. 2011(07)
[8]用于卵母细胞玻璃化冷冻的几种方法的传热分析[J]. 王海松,周新丽,刘宝林,袁骥. 低温与超导. 2011(04)
[9]不同玻璃化冷冻保护剂对早卵裂期小鼠胚胎生存发育的影响[J]. 张蔚,曹炀,白照岱,陈振文. 实验与检验医学. 2011(01)
[10]GMP玻璃化冷冻水牛GV期和MⅡ期卵母细胞[J]. 陈玉,杨素芳,王晓丽,卞桂华,韦精卫,石德顺. 中国兽医学报. 2011(01)
博士论文
[1]发育微环境对卵母细胞和早期胚胎线粒体的影响[D]. 舒静.浙江大学 2012
[2]正己烷对卵母细胞成熟和颗粒细胞凋亡的影响及其机制研究[D]. 刘瑾.福建医科大学 2011
[3]低温冷冻过程中胞内冰晶生长机制与应用研究[D]. 杨戈尔.上海交通大学 2011
[4]猪卵母细胞的超低温冷冻保存及影响其冻后发育能力的机理研究[D]. 武彩红.南京农业大学 2006
硕士论文
[1]影响绵羊卵母细胞玻璃化冷冻效果的因素研究[D]. 莫显红.河北农业大学 2011
[2]猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的研究[D]. 陆文昊.安徽农业大学 2010
[3]胚胎植入期二硫化碳暴露致小鼠子宫内膜细胞DNA损伤与凋亡研究[D]. 沈春子.山东大学 2010
[4]外源性BDE-209对小鼠体外受精早期胚胎发育及精子DNA损伤的影响[D]. 王玲.暨南大学 2010
[5]猪卵母细胞孤雌激活及玻璃化冷冻的研究[D]. 王磊.南京农业大学 2009
[6]玻璃化冷冻保存对体外成熟猪卵母细胞与胚胎DNA的影响[D]. 肖宇.上海交通大学 2008
[7]猪体外生产胚胎玻璃化冷冻保存的研究[D]. 葛立军.南京农业大学 2007
[8]猪卵母细胞玻璃化冷冻及体外成熟的研究[D]. 黄晶.西北农林科技大学 2007
[9]牛早期卵母细胞和成熟前后的超微结构变化[D]. 邱志芳.安徽农业大学 2006
[10]彗星试验方法的初步研究[D]. 杨红莲.新疆农业大学 2004
本文编号：3298793
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
第一章 卵母细胞冻存研究概况
1 卵母细胞冷冻保存的意义及概况
2 低温冷冻的原理及损伤机理
3 玻璃化冷冻保护剂
3.1 渗透性保护剂
3.2 非渗透性保护剂
3.3 抗冻蛋白
3.4 纳米颗粒
3.5 新型抗冻保护剂
4 卵母细胞玻璃化冷冻保存方法及其影响
4.1 开放式拉长麦管法(Open pulled straw,OPS)
4.2 半麦管法(Hemi-straw)
4.3 毛细玻璃法(GMP)
4.4 电镜铜网法(electron microscopic grids)
4.5 冷冻环玻璃化法(Cryo-loop Vitrification,CLV)
4.6 固体表面冷冻法(Solid-Surface vitrification,SSV)
4.7 微滴法(Microdroplet,MDS)
5 冷冻对卵母细胞的影响及损伤检测方法
5.1 对超微结构的影响
5.2 对细胞骨架的影响
5.3 对透明带的影响
5.4 对DNA的影响
第二章 玻璃化冷冻保护液对不同时期卵母细胞发育能力的影响
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.3 试验设计
1.4 数据分析
2 结果
2.1 冷冻保护液对猪GV期、MⅡ期卵母细胞发育能力的影响
2.2 三种冷冻保护液对玻璃化冷冻GV期、MⅡ期卵母细胞发育能力的影响
2.3 三种冷冻载体对GV期、MⅡ期卵母细胞冷冻效果的影响
3 讨论
第三章 冷冻前后GV期及MⅡ期卵母细胞的超微结构观察
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.3 试验设计
2 结果
2.1 GV期卵母细胞超微结构观察
2.2 MⅡ期卵母细胞超微结构观察
2.3 玻璃化冷冻后GV期卵母细胞超微结构的变化
2.4 玻璃化冷冻后MⅡ期卵母细胞超微结构的变化
3 讨论
第四章 玻璃化冷冻对卵母细胞DNA的影响
1 材料和方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.3 试验设计
1.4 数据统计分析
2 结果
2.1 玻璃化冷冻对GV期卵母细胞DNA损伤的检测
2.2 玻璃化冷冻对MⅡ期卵母细胞DNA损伤的检测
3 讨论
第五章 结论
参考文献
图片与说明
致谢
作者简介
攻读学位期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]纳米颗粒对猪GV期卵母细胞低温保存效果的影响[J]. 李维杰,周新丽,刘宝林,戴建军,吕福扣,张德福,徐利. 中国生物医学工程学报. 2013(05)
[2]纳米颗粒对细胞亚结构的影响[J]. 薄洋,金承钰. 实验室研究与探索. 2013(10)
[3]纳米低温保护剂导热系数研究[J]. 唐临利,刘宝林,郝保同,刘连军. 制冷学报. 2013(04)
[4]玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞透明带超微结构变化及体外受精效果的影响[J]. 袁佃帅,莫显红,王亮,梁莹,朱士恩. 中国畜牧杂志. 2013(03)
[5]3种冷冻方法对猪MII期卵母细胞线粒体分布和损伤的影响[J]. 戴建军,吴彩凤,张廷宇,张树山,徐利,张德福. 畜牧兽医学报. 2012(10)
[6]玻璃化冷冻对猪MⅡ卵母细胞皮质颗粒分布及其激活后胚胎发育能力的影响[J]. 郑天威,傅祥伟,吴国权,贾宝瑜,朱士恩. 中国畜牧杂志. 2012(19)
[7]生物材料纳米低温保存技术研究进展[J]. 狄德瑞,何志祝,刘静. 化工学报. 2011(07)
[8]用于卵母细胞玻璃化冷冻的几种方法的传热分析[J]. 王海松,周新丽,刘宝林,袁骥. 低温与超导. 2011(04)
[9]不同玻璃化冷冻保护剂对早卵裂期小鼠胚胎生存发育的影响[J]. 张蔚,曹炀,白照岱,陈振文. 实验与检验医学. 2011(01)
[10]GMP玻璃化冷冻水牛GV期和MⅡ期卵母细胞[J]. 陈玉,杨素芳,王晓丽,卞桂华,韦精卫,石德顺. 中国兽医学报. 2011(01)
博士论文
[1]发育微环境对卵母细胞和早期胚胎线粒体的影响[D]. 舒静.浙江大学 2012
[2]正己烷对卵母细胞成熟和颗粒细胞凋亡的影响及其机制研究[D]. 刘瑾.福建医科大学 2011
[3]低温冷冻过程中胞内冰晶生长机制与应用研究[D]. 杨戈尔.上海交通大学 2011
[4]猪卵母细胞的超低温冷冻保存及影响其冻后发育能力的机理研究[D]. 武彩红.南京农业大学 2006
硕士论文
[1]影响绵羊卵母细胞玻璃化冷冻效果的因素研究[D]. 莫显红.河北农业大学 2011
[2]猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的研究[D]. 陆文昊.安徽农业大学 2010
[3]胚胎植入期二硫化碳暴露致小鼠子宫内膜细胞DNA损伤与凋亡研究[D]. 沈春子.山东大学 2010
[4]外源性BDE-209对小鼠体外受精早期胚胎发育及精子DNA损伤的影响[D]. 王玲.暨南大学 2010
[5]猪卵母细胞孤雌激活及玻璃化冷冻的研究[D]. 王磊.南京农业大学 2009
[6]玻璃化冷冻保存对体外成熟猪卵母细胞与胚胎DNA的影响[D]. 肖宇.上海交通大学 2008
[7]猪体外生产胚胎玻璃化冷冻保存的研究[D]. 葛立军.南京农业大学 2007
[8]猪卵母细胞玻璃化冷冻及体外成熟的研究[D]. 黄晶.西北农林科技大学 2007
[9]牛早期卵母细胞和成熟前后的超微结构变化[D]. 邱志芳.安徽农业大学 2006
[10]彗星试验方法的初步研究[D]. 杨红莲.新疆农业大学 2004
本文编号：3298793
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3298793.html
