兴义鸭MEF2C和MEF2D基因的SNPs分析及原核表达研究
发布时间：2021-07-24 09:38
肌细胞增强因子2C（myocyte enhancer factor 2C,MEF2C）和肌细胞增强因子2D（myocyte enhancer factor 2D,MEF2D）是肌细胞增强因子2（myocyte enhancer factor 2,MEF2）基因家族的成员,被认为与骨骼肌发生发育和再生有关。本研究以贵州省地方品种兴义鸭为研究对象,以MEF2C和MEF2D基因为候选基因,利用直接测序方法检测两个基因外显子的多态性,并与屠宰性状各指标进行相关性分析,同时构建两个基因的原核表达载体,以期为兴义鸭屠宰性状的分子标记辅助选育提供依据,为其他畜禽相关基因的研究提供参考,为下一步相关蛋白质功能的研究提供基础。研究结果如下:1、兴义鸭MEF2C和MEF2D基因多态性与屠宰性状的关联性研究。在本试验群体MEF2C基因外显子中没有发现SNP位点。在MEF2D基因外显子发现了6个多态位点,均为同义突变;群体遗传学分析显示,6个多态位点均表现为中度多态（0.25<PIC<0.5）,经χ2检验表明兴义鸭群体在这6个多态位点均处于Hardy-weinberg平衡状态（P>0.05）...
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1 贵州兴义鸭概述
2 影响畜禽屠宰性状的候选基因
2.1 MEF2C基因的研究进展
2.2 MEF2D基因的研究进展
3 可变剪接
4 本研究的目的和意义
第二章 兴义鸭MEF2C和MEF2D基因多态性与屠宰性状的关联性研究
1 试验材料
1.1 试验动物与样品
1.2 主要试剂
1.3 试验仪器设备
1.4 主要试剂的配制
2 试验方法
2.1 基因组DNA提取
2.2 引物设计
2.3 PCR扩增及测序
2.4 数据分析
3 结果与分析
3.1 MEF2C、MEF2D基因PCR扩增结果
3.2 测序结果分析
3.3 多态位点遗传多态性的分析
3.4 MEF2D多态性与屠宰性状相关性分析
4 讨论
5 小结
第三章 兴义鸭MEF2C和MEF2D基因原核表达载体的构建
1 试验材料
1.1 样品、菌株、载体
1.2 试验主要试剂
1.3 试验仪器
1.4 常用试剂配制
2 试验方法
2.1 兴义鸭组织总RNA提取
2.2 cDNA的合成
2.3 MEF2C和MEF2D基因CDS区的克隆
2.4 pET32a(+)-MEF2C、pET32a(+)-MEF2D原核表达载体构建
3 结果与分析
3.1 CDS区扩增产物的PCR检测结果
3.2 pUCmT-MEF2C/pMD18-T-MEF2D重组载体的菌液PCR鉴定和测序鉴定
3.3 pUCmT-MEF2C/pMD18-T-MEF2D重组质粒的双酶切检测
3.4 pET32a(+)-MEF2C/MEF2D重组载体的构建
3.5 MEF2C和MEF2D基因CDS区的稀有密码子分析
4 讨论
5 小结
第四章 兴义鸭MEF2C和MEF2D基因原核表达
1 实验材料
1.1 实验样品
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器设备
1.4 主要试剂的配制
2 实验方法
2.1 重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞
2.2 总蛋白的提取
2.3 蛋白样品变性处理
2.4 SDS-PAGE凝胶电泳
2.5 重组蛋白的Western Blot检测
3 结果与分析
3.1 重组载体和空载体转入BL21(DE3)感受态的酶切检测
3.2 重组蛋白的表达形式
3.3 重组蛋白western blot的检测
4 讨论
5 小结
第五章 结论与展望
1 结论
2 展望
参考文献
致谢
附录
【参考文献】：
期刊论文
[1]简州大耳羊早期胎儿到新出生阶段背最长肌中可变剪接的鉴定与分析[J]. 郭家中,陶海溪,李鹏飞,李利,张红平. 西北农业学报. 2018(03)
[2]兴义鸭MyoG基因SNPs与屠宰性状相关性分析[J]. 彭邦星,李辉,易恒洁,赵忠海,卜小雁. 黑龙江畜牧兽医. 2017(03)
[3]MEF2D在肺癌中的表达及其在肺癌细胞增殖与转移中的作用[J]. 张秀芳,孙莹,赵丹,白小雪,魏静,华树成. 中国老年学杂志. 2016(14)
[4]组学时代的可变剪接研究进展[J]. 周冬虎,姜颖,贺福初. 中国科学:生命科学. 2015(12)
[5]高邮鸭VLDLR基因部分序列的多态性及其与腹脂率的关联分析[J]. 赵南南,张汤杰. 畜牧与兽医. 2015(07)
[6]梅山猪TAP1基因多态性及组织表达谱分析[J]. 戴超辉,陈慧子,吴森,杨建生,吴圣龙,包文斌. 中国畜牧杂志. 2014(17)
[7]三穗鸭MSTN基因多态性与屠宰性状相关性研究[J]. 易恒洁,李辉,杨胜林,赵忠海,彭邦星. 中国家禽. 2013(23)
[8]北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1的表达分析及其原核表达与蛋白纯化[J]. 陶韵文,徐洁森,魏建和,孙晶,徐艳红,杨欣,张岩,刘娟,隋春. 药学学报. 2013(08)
[9]鸭TLR4基因可变剪接体的克隆、鉴定及组织表达分析[J]. 黄正洋,陈阳,李欣钰,甄霆,张扬,徐琪,段修军,赵文明,陈国宏. 畜牧兽医学报. 2013(05)
[10]棉花GhCOMT1基因原核表达载体构建及蛋白纯化和Western鉴定[J]. 李波,倪志勇,李晓东,范玲. 西北植物学报. 2012(10)
博士论文
[1]miR-218通过影响MEF2D表达对非小细胞肺癌的作用研究[D]. 孙莹.吉林大学 2016
[2]神经生长因子MEF2D氧化修饰及降解在帕金森发病机制中的作用[D]. 高立.第四军医大学 2013
[3]猪Sirtuin家族基因的克隆及脂肪生成中SIRT3的功能研究[D]. 金丹.华中农业大学 2013
硕士论文
[1]兴义鸭MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D基因克隆与组织时空表达研究[D]. 赵忠海.贵州大学 2016
[2]MSTN、MyoG、MEF2A基因与兴义鸭屠宰性状相关性分析[D]. 彭邦星.贵州大学 2015
[3]山羊MEF2C基因选择性剪接鉴定及其单核苷酸多态性与生长性状的关联分析[D]. 沈并兵.四川农业大学 2015
[4]MEF2D在脑胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞增殖和迁移的影响[D]. 李晨.宁夏医科大学 2015
[5]鸭MEF2D基因编码区克隆及其微卫星多态与屠宰性能的关联分析[D]. 胡继伟.四川农业大学 2014
[6]黄牛MEF2C基因遗传变异及其效应分析和组织表达规律研究[D]. 展召阳.西北农林科技大学 2014
[7]绍兴鸭PPARγ、GH基因多态性与生长发育性能和屠宰性能关联性分析[D]. 李丽.扬州大学 2014
[8]小体型北京鸭屠宰性能及其相关基因遗传多态性研究[D]. 吴豪.中国农业科学院 2014
[9]新疆卡拉库尔羊TNF-α基因的克隆、原核表达及抗原性分析[D]. 贺艳艳.塔里木大学 2012
[10]新疆卡拉库尔羊Fas基因的克隆、原核表达及抗原性分析[D]. 潘辉.塔里木大学 2012
本文编号：3300405
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1 贵州兴义鸭概述
2 影响畜禽屠宰性状的候选基因
2.1 MEF2C基因的研究进展
2.2 MEF2D基因的研究进展
3 可变剪接
4 本研究的目的和意义
第二章 兴义鸭MEF2C和MEF2D基因多态性与屠宰性状的关联性研究
1 试验材料
1.1 试验动物与样品
1.2 主要试剂
1.3 试验仪器设备
1.4 主要试剂的配制
2 试验方法
2.1 基因组DNA提取
2.2 引物设计
2.3 PCR扩增及测序
2.4 数据分析
3 结果与分析
3.1 MEF2C、MEF2D基因PCR扩增结果
3.2 测序结果分析
3.3 多态位点遗传多态性的分析
3.4 MEF2D多态性与屠宰性状相关性分析
4 讨论
5 小结
第三章 兴义鸭MEF2C和MEF2D基因原核表达载体的构建
1 试验材料
1.1 样品、菌株、载体
1.2 试验主要试剂
1.3 试验仪器
1.4 常用试剂配制
2 试验方法
2.1 兴义鸭组织总RNA提取
2.2 cDNA的合成
2.3 MEF2C和MEF2D基因CDS区的克隆
2.4 pET32a(+)-MEF2C、pET32a(+)-MEF2D原核表达载体构建
3 结果与分析
3.1 CDS区扩增产物的PCR检测结果
3.2 pUCmT-MEF2C/pMD18-T-MEF2D重组载体的菌液PCR鉴定和测序鉴定
3.3 pUCmT-MEF2C/pMD18-T-MEF2D重组质粒的双酶切检测
3.4 pET32a(+)-MEF2C/MEF2D重组载体的构建
3.5 MEF2C和MEF2D基因CDS区的稀有密码子分析
4 讨论
5 小结
第四章 兴义鸭MEF2C和MEF2D基因原核表达
1 实验材料
1.1 实验样品
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器设备
1.4 主要试剂的配制
2 实验方法
2.1 重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞
2.2 总蛋白的提取
2.3 蛋白样品变性处理
2.4 SDS-PAGE凝胶电泳
2.5 重组蛋白的Western Blot检测
3 结果与分析
3.1 重组载体和空载体转入BL21(DE3)感受态的酶切检测
3.2 重组蛋白的表达形式
3.3 重组蛋白western blot的检测
4 讨论
5 小结
第五章 结论与展望
1 结论
2 展望
参考文献
致谢
附录
【参考文献】：
期刊论文
[1]简州大耳羊早期胎儿到新出生阶段背最长肌中可变剪接的鉴定与分析[J]. 郭家中,陶海溪,李鹏飞,李利,张红平. 西北农业学报. 2018(03)
[2]兴义鸭MyoG基因SNPs与屠宰性状相关性分析[J]. 彭邦星,李辉,易恒洁,赵忠海,卜小雁. 黑龙江畜牧兽医. 2017(03)
[3]MEF2D在肺癌中的表达及其在肺癌细胞增殖与转移中的作用[J]. 张秀芳,孙莹,赵丹,白小雪,魏静,华树成. 中国老年学杂志. 2016(14)
[4]组学时代的可变剪接研究进展[J]. 周冬虎,姜颖,贺福初. 中国科学:生命科学. 2015(12)
[5]高邮鸭VLDLR基因部分序列的多态性及其与腹脂率的关联分析[J]. 赵南南,张汤杰. 畜牧与兽医. 2015(07)
[6]梅山猪TAP1基因多态性及组织表达谱分析[J]. 戴超辉,陈慧子,吴森,杨建生,吴圣龙,包文斌. 中国畜牧杂志. 2014(17)
[7]三穗鸭MSTN基因多态性与屠宰性状相关性研究[J]. 易恒洁,李辉,杨胜林,赵忠海,彭邦星. 中国家禽. 2013(23)
[8]北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1的表达分析及其原核表达与蛋白纯化[J]. 陶韵文,徐洁森,魏建和,孙晶,徐艳红,杨欣,张岩,刘娟,隋春. 药学学报. 2013(08)
[9]鸭TLR4基因可变剪接体的克隆、鉴定及组织表达分析[J]. 黄正洋,陈阳,李欣钰,甄霆,张扬,徐琪,段修军,赵文明,陈国宏. 畜牧兽医学报. 2013(05)
[10]棉花GhCOMT1基因原核表达载体构建及蛋白纯化和Western鉴定[J]. 李波,倪志勇,李晓东,范玲. 西北植物学报. 2012(10)
博士论文
[1]miR-218通过影响MEF2D表达对非小细胞肺癌的作用研究[D]. 孙莹.吉林大学 2016
[2]神经生长因子MEF2D氧化修饰及降解在帕金森发病机制中的作用[D]. 高立.第四军医大学 2013
[3]猪Sirtuin家族基因的克隆及脂肪生成中SIRT3的功能研究[D]. 金丹.华中农业大学 2013
硕士论文
[1]兴义鸭MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D基因克隆与组织时空表达研究[D]. 赵忠海.贵州大学 2016
[2]MSTN、MyoG、MEF2A基因与兴义鸭屠宰性状相关性分析[D]. 彭邦星.贵州大学 2015
[3]山羊MEF2C基因选择性剪接鉴定及其单核苷酸多态性与生长性状的关联分析[D]. 沈并兵.四川农业大学 2015
[4]MEF2D在脑胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞增殖和迁移的影响[D]. 李晨.宁夏医科大学 2015
[5]鸭MEF2D基因编码区克隆及其微卫星多态与屠宰性能的关联分析[D]. 胡继伟.四川农业大学 2014
[6]黄牛MEF2C基因遗传变异及其效应分析和组织表达规律研究[D]. 展召阳.西北农林科技大学 2014
[7]绍兴鸭PPARγ、GH基因多态性与生长发育性能和屠宰性能关联性分析[D]. 李丽.扬州大学 2014
[8]小体型北京鸭屠宰性能及其相关基因遗传多态性研究[D]. 吴豪.中国农业科学院 2014
[9]新疆卡拉库尔羊TNF-α基因的克隆、原核表达及抗原性分析[D]. 贺艳艳.塔里木大学 2012
[10]新疆卡拉库尔羊Fas基因的克隆、原核表达及抗原性分析[D]. 潘辉.塔里木大学 2012
本文编号：3300405
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3300405.html
