AJV-HF211毒株感染的DF-1细胞中NALP3和MDA5的转录水平
发布时间：2021-07-24 23:38
天然免疫系统通过表达不同的模式识别受体（pattern recognition receptors, PRRs）特异性地识别入侵的病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns, PAMPs）,发挥级联信号转导作用,从而达到抗病毒免疫防御作用。MDA5和NALP3分别为模式识别受体维甲酸诱导基因I样受体家族（Retinoic acid-inducible gene I-like receptors, RLRs）家族和核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族（Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors, NLRs）亚家族中的重要成员。它们能够识别RNA病毒,并调节细胞因子,发挥非特异抗病毒作用。J亚群禽白血病（Avian leucosis virus subgroup J, ALV-J）是近年来受到广泛关注的禽白血病的一种,感染该病毒的鸡往往会发生免疫抑制,导致机体的免疫应答受阻。本研究为了解鸡模式识别受体NALP3和MDA5在ALV-J感染细胞中的作用,本研究通过在对一株ALV...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?ＡＬＶ－Ｊ基因组的结构??Ｆｉｇ．?１?ＳｔｒｕｃＵｉｒｅ?ｏｆ?也ｅ?ＡＬＶ－Ｊ?ｐｒｏｖｉｒａｌ?ｇｅｎｏｍｅ??
２．１疑似患鸡的主要组织病变??对疑似病鸡进行剖检，可见肝脏、脾脏、卵巢明显肿大，巧脏表面有弥漫性白色??结节状的肿瘤。脾脏和也脏表面有点状出血斑（见图２－１）。骨髓质地脆弱，颜色灰白。??胸腺和法氏囊萎缩。??圓國瞧??肝脏?脾脏?卵巢??图２－１临床感染ＡＬＶ－Ｊ病巧剖检病变??巧ｇ．２－１?Ｐａ化ｏｌｏｇｉｃａｌ?ｌｅｓｉｏｎｓ?ｏｆ?ｃｌｉｎｉｃａｌ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ＡＬＶ－Ｊ?ｓｉｃｋ?ｃｈｉｃｋｅｎ??２．２鸡巧成纤维细胞分离ＡＬＶ－Ｊ??取病鸡的肝脏组织研磨后无菌过滤分别接种于制备好的鸡巧成纤维细胞和ＤＦ－１??细胞，放置Ｃ〇２培养箱培养ｌ￣２ｄ后，传代一次，再接种病料液，同时设接ＤＭＥＭ??不接病料液做阴性对照，维持７ｄ后观察细胞状态，结果表明，细胞未产生明显病变。??２．３?ｐ２７群特异性抗原的检测结果??收集上述培养７ｄ后ＤＦ－１细胞上清，继续盲传３代后，取５份细胞培养物上清，??经ＥＬＩＳＡ试剂盒检测，结果呈阳性（见表２－１）。??表２－１?ＡＬＶ的ＥＬＩＳＡ抗原检测ＤＦ－１上清结果???Ｔａｂｌｅ．２－１?民ｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＥＬＩＳＡ?ａｎｔｉｇｅｎ?ｄｅ化ｃｔ?ＡＬＶ?ｉｎ?出ｅ?ＤＦ－１???试剂盒名称?上清１号上清２号?上清３号?上清４号?上清５号??ｐ２７?抗原?ＥＬＩＳＡ?检?￣?￣?￣?￣?￣??测试剂盒?????????十??２．４?ＡＬＶ－Ｊ的民Ｔ－ＰＣ民检测与鉴定结果??分别提取疑似病鸡肝组织和肝组织研磨病料液接种的ＤＦ－１细胞的Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ，??通过反转录试剂盒合成第一链ｃＤＮＡ
提取ＡＪＶ－ＨＦ２１１分离株感染ＤＦ－１细胞的ＤＮＡ，通过Ｐｒｉｍｅｒ?Ｐｒｅｍｉｅｒ?５软件自行??设计了一对特异性扩增ｅｎｖ基因的ＰＣ民引物（见１．６．３．１）扩增，结果获得大小为２１００ｂｐ??左右的条带（图２－３），与预期大小相符。??ｉ＿．’??ｂｐ?Ｍ?１??。…画??ｉｏｏ〇ＢｈＢ｜＾＾＾９??７５０??５００??２５０??－｝ＱＱ??图２－３巧！Ｖ基因ＰＣ民扩增??？?Ｍ－?．ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?２０００；?１．如Ｖ?基因??巧ｇ．２－３?ＰＣ民?ａｍｐＨｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?饥Ｖ?ｇｅｎｅ??Ｍ．ＤＮＡ?Ｍｗｋ巧?２０００；?１?■飢Ｖ?ｇｅｎｅ??将纯化的ｅ？ｖ基因片段与ｐＭＤ１８－Ｔ载体连接、转化ＤＨ５ａ感受态细胞，挑取阳??性克隆送生物公司测序，经ＮＣＢＩＢＩａｓｔ比对分析，结果对实验室分离的ＡＪＶ－ＨＦ２１１?．??毒株抓Ｖ氨基酸的序列进行分化结果显示（图２－４）?ＡＪＶ－ＨＦ２１１分离毒株ｅｎｖ基因??２３??
【参考文献】：
期刊论文
[1]差异极大的不同准种隐藏于同一J亚型禽白血病病毒野毒株中[J]. 毛娅卿,李卫华,董宣,刘金华,赵鹏. 中国科学:生命科学. 2013(06)
[2]J亚群禽白血病病毒安徽分离株的鉴定及其gp85基因序列分析[J]. 安好峰,戴银,潘孝成,侯宏艳,赵瑞宏,胡晓苗,李福宝,张丹俊. 中国畜牧兽医. 2012(12)
[3]雏鸡不同组织TLR1、TLR2、TLR4、TLR5和TLR15 mRNA转录水平相对定量研究[J]. 周作勇,聂奎,宋振辉,胡世君,周荣琼,郭智莉,刘丽琼,秦波. 畜牧兽医学报. 2010(11)
[4]商品代罗曼蛋鸡发生禽J-亚群白血病[J]. 张丹俊,赵瑞宏,程宝艳,胡晓苗,潘孝成,詹凯,许月英,张良林. 安徽农业科学. 2009(06)
[5]禽白血病病毒跨膜蛋白在膜融合及免疫抑制中的作用[J]. 刘青,成子强. 动物医学进展. 2008(10)
[6]黄羽肉种鸡J亚群白血病病例诊断初报[J]. 张丹俊,潘孝成,赵瑞宏,王少林. 中国畜牧兽医. 2008(02)
[7]新城疫病毒F蛋白七肽重复序列（HR）三螺旋HR212蛋白的抗体抑制病毒和细胞融合[J]. 李影,田波. 自然科学进展. 2007(01)
[8]J亚群禽白血病病毒（ALV-J）ELISA检测方法的建立[J]. 叶建强,秦爱建,邵红霞,金文杰,刘岳龙. 中国兽医学报. 2006(03)
[9]商品代肉鸡J亚群禽白血病的病理及病毒分离鉴定[J]. 张志,崔治中,赵宏坤,王海蓉,许益明. 中国兽医杂志. 2002(06)
[10]鸡的J亚群白血病病毒的分离及部分序列比较[J]. 杜岩,崔治中,秦爱建,RFSilva,LFLee. 病毒学报. 2000(04)
硕士论文
[1]DF-1细胞分泌的外源体（Exosomes）在ALV-J免疫抑制中的作用[D]. 陈洪博.山东农业大学 2011
本文编号：3301663
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?ＡＬＶ－Ｊ基因组的结构??Ｆｉｇ．?１?ＳｔｒｕｃＵｉｒｅ?ｏｆ?也ｅ?ＡＬＶ－Ｊ?ｐｒｏｖｉｒａｌ?ｇｅｎｏｍｅ??
２．１疑似患鸡的主要组织病变??对疑似病鸡进行剖检，可见肝脏、脾脏、卵巢明显肿大，巧脏表面有弥漫性白色??结节状的肿瘤。脾脏和也脏表面有点状出血斑（见图２－１）。骨髓质地脆弱，颜色灰白。??胸腺和法氏囊萎缩。??圓國瞧??肝脏?脾脏?卵巢??图２－１临床感染ＡＬＶ－Ｊ病巧剖检病变??巧ｇ．２－１?Ｐａ化ｏｌｏｇｉｃａｌ?ｌｅｓｉｏｎｓ?ｏｆ?ｃｌｉｎｉｃａｌ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ＡＬＶ－Ｊ?ｓｉｃｋ?ｃｈｉｃｋｅｎ??２．２鸡巧成纤维细胞分离ＡＬＶ－Ｊ??取病鸡的肝脏组织研磨后无菌过滤分别接种于制备好的鸡巧成纤维细胞和ＤＦ－１??细胞，放置Ｃ〇２培养箱培养ｌ￣２ｄ后，传代一次，再接种病料液，同时设接ＤＭＥＭ??不接病料液做阴性对照，维持７ｄ后观察细胞状态，结果表明，细胞未产生明显病变。??２．３?ｐ２７群特异性抗原的检测结果??收集上述培养７ｄ后ＤＦ－１细胞上清，继续盲传３代后，取５份细胞培养物上清，??经ＥＬＩＳＡ试剂盒检测，结果呈阳性（见表２－１）。??表２－１?ＡＬＶ的ＥＬＩＳＡ抗原检测ＤＦ－１上清结果???Ｔａｂｌｅ．２－１?民ｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＥＬＩＳＡ?ａｎｔｉｇｅｎ?ｄｅ化ｃｔ?ＡＬＶ?ｉｎ?出ｅ?ＤＦ－１???试剂盒名称?上清１号上清２号?上清３号?上清４号?上清５号??ｐ２７?抗原?ＥＬＩＳＡ?检?￣?￣?￣?￣?￣??测试剂盒?????????十??２．４?ＡＬＶ－Ｊ的民Ｔ－ＰＣ民检测与鉴定结果??分别提取疑似病鸡肝组织和肝组织研磨病料液接种的ＤＦ－１细胞的Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ，??通过反转录试剂盒合成第一链ｃＤＮＡ
提取ＡＪＶ－ＨＦ２１１分离株感染ＤＦ－１细胞的ＤＮＡ，通过Ｐｒｉｍｅｒ?Ｐｒｅｍｉｅｒ?５软件自行??设计了一对特异性扩增ｅｎｖ基因的ＰＣ民引物（见１．６．３．１）扩增，结果获得大小为２１００ｂｐ??左右的条带（图２－３），与预期大小相符。??ｉ＿．’??ｂｐ?Ｍ?１??。…画??ｉｏｏ〇ＢｈＢ｜＾＾＾９??７５０??５００??２５０??－｝ＱＱ??图２－３巧！Ｖ基因ＰＣ民扩增??？?Ｍ－?．ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?２０００；?１．如Ｖ?基因??巧ｇ．２－３?ＰＣ民?ａｍｐＨｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?饥Ｖ?ｇｅｎｅ??Ｍ．ＤＮＡ?Ｍｗｋ巧?２０００；?１?■飢Ｖ?ｇｅｎｅ??将纯化的ｅ？ｖ基因片段与ｐＭＤ１８－Ｔ载体连接、转化ＤＨ５ａ感受态细胞，挑取阳??性克隆送生物公司测序，经ＮＣＢＩＢＩａｓｔ比对分析，结果对实验室分离的ＡＪＶ－ＨＦ２１１?．??毒株抓Ｖ氨基酸的序列进行分化结果显示（图２－４）?ＡＪＶ－ＨＦ２１１分离毒株ｅｎｖ基因??２３??
【参考文献】：
期刊论文
[1]差异极大的不同准种隐藏于同一J亚型禽白血病病毒野毒株中[J]. 毛娅卿,李卫华,董宣,刘金华,赵鹏. 中国科学:生命科学. 2013(06)
[2]J亚群禽白血病病毒安徽分离株的鉴定及其gp85基因序列分析[J]. 安好峰,戴银,潘孝成,侯宏艳,赵瑞宏,胡晓苗,李福宝,张丹俊. 中国畜牧兽医. 2012(12)
[3]雏鸡不同组织TLR1、TLR2、TLR4、TLR5和TLR15 mRNA转录水平相对定量研究[J]. 周作勇,聂奎,宋振辉,胡世君,周荣琼,郭智莉,刘丽琼,秦波. 畜牧兽医学报. 2010(11)
[4]商品代罗曼蛋鸡发生禽J-亚群白血病[J]. 张丹俊,赵瑞宏,程宝艳,胡晓苗,潘孝成,詹凯,许月英,张良林. 安徽农业科学. 2009(06)
[5]禽白血病病毒跨膜蛋白在膜融合及免疫抑制中的作用[J]. 刘青,成子强. 动物医学进展. 2008(10)
[6]黄羽肉种鸡J亚群白血病病例诊断初报[J]. 张丹俊,潘孝成,赵瑞宏,王少林. 中国畜牧兽医. 2008(02)
[7]新城疫病毒F蛋白七肽重复序列（HR）三螺旋HR212蛋白的抗体抑制病毒和细胞融合[J]. 李影,田波. 自然科学进展. 2007(01)
[8]J亚群禽白血病病毒（ALV-J）ELISA检测方法的建立[J]. 叶建强,秦爱建,邵红霞,金文杰,刘岳龙. 中国兽医学报. 2006(03)
[9]商品代肉鸡J亚群禽白血病的病理及病毒分离鉴定[J]. 张志,崔治中,赵宏坤,王海蓉,许益明. 中国兽医杂志. 2002(06)
[10]鸡的J亚群白血病病毒的分离及部分序列比较[J]. 杜岩,崔治中,秦爱建,RFSilva,LFLee. 病毒学报. 2000(04)
硕士论文
[1]DF-1细胞分泌的外源体（Exosomes）在ALV-J免疫抑制中的作用[D]. 陈洪博.山东农业大学 2011
本文编号：3301663
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