牛呼吸道合胞体病毒单抗的制备和实验感染豚鼠的研究

发布时间：2021-07-26 18:06

　　牛呼吸道合胞体病毒是引起犊牛呼吸道疾病的一个重要的致病原,属于副粘病毒科，肺炎病毒属。BRSV感染率相当高，但是死亡率低。然而随着集约化养殖，BRSV引起牛的呼吸道疾病而导致死亡率增加。本病一般冬季多发，主要感染犊牛。由于我国尚未将BRSV列入检疫范围，有可能从有该病国家引进带毒的牛，导致BRSV在我国的传播。及时开展BRSV的研究对于防控该病有重要意义。利用牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）接种牛肺细胞（BL），提取病毒RNA。通过RT-PCR扩增BRSV的核蛋白基因，然后定向克隆到原核表达载体pET30a，获得重组表达质粒pET30a-N。将重组质粒转化表达菌BL21（DE3），经增菌培养和IPTG诱导以及SDS-PAGE和Western blot分析，成功表达出了核蛋白（N），其分子量约为49kD。为制备BRSV核蛋白的单克隆抗体，用纯化的重组核蛋白免疫BALB/c小鼠，取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。采用以BRSV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆，经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗N特异性MAb的杂交瘤细胞株，分别命名为2D12与4B10。用2D12与4B10杂交瘤细... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

BRSV的模式图

图 2-1 目的片段的扩增Fig2-1 The product of RT-PCRM：DNAMarker 1：The product of RT-PCR30a-N 经限制性内切酶消化后可见两条带，)。达与检测-N 转化的表达菌 BL21(DE3)经增菌培养后波处理后高速离心，取沉淀和上清分别进行 49kD，并且是以包涵体形式存在(图 2-2)。

图 2-1 目的片段的扩增Fig2-1 The product of RT-PCRM：DNAMarker 1：The product of RT-质粒 pET30a-N 经限制性内切酶消化后可见两条带(图略)。白的表达与检测 pET30a-N 转化的表达菌 BL21(DE3)经增菌培养心和超声波处理后高速离心，取沉淀和上清分别子量约为 49kD，并且是以包涵体形式存在(图 2

【参考文献】：
期刊论文
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[3]牛呼吸道合胞体病毒RT-PCR检测方法的建立[J]. 王红,朴范泽,侯喜林.  动物医学进展. 2008(11)
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本文编号：3304082