猪链球菌2型表面蛋白SntA抑制补体经典途径激活

发布时间：2021-07-27 09:56

　　补体系统是构成宿主第一道免疫防线的先天性免疫的重要组成部分,并在先天性免疫与获得性免疫之间起着桥梁作用。补体系统可以快速识别和清除病原微生物,然而,病原微生物也进化出多种机制逃避补体系统的攻击。猪链球菌2型（Streptococcus suis serotype 2, SS2）是一种重要的人兽共患病原菌,严重危害养猪业和人类健康。本实验室的前期研究发现,SS2的表面蛋白SntA是一种血红素结合蛋白,也是SS2的毒力因子之一,它可以与猪的补体分子C1qA相互作用。本文进一步研究了SntA与C1qA相互作用对补体经典激活途径的影响,取得如下主要结果：SntA与猪IgG竞争性结合C1qA：分别表达纯化SntA和猪C1qA蛋白,将C1qA蛋白包被ELISA板,加入猪IgG和/或SntA,洗涤后加入HRP标记的羊抗猪IgG并显色,用BSA代替SntA作对照。结果显示,SntA蛋白能够与猪IgG竞争性结合C1qA蛋白,且随着SntA蛋白浓度的升高,对猪IgG结合C1qA的抑制率也升高,当SntA蛋白浓度到达4.9mg/ML时,抑制率达到99.55%。说明SntA蛋白能与猪IgG竞争性结合C1 qA... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表(Abbreviation)
1 文献综述
    1.1 补体系统
        1.1.1 补体系统的概述
        1.1.2 补体的激活
        1.1.3 补体的调节
            1.1.3.1 FH家族
            1.1.3.2 膜结合调节蛋白
            1.1.3.3 其它液态调节蛋白
    1.2 病原微生物(病毒、细菌、寄生虫)的补体逃逸
    1.3 猪链球菌概述
        1.3.1 猪链球菌病原学
        1.3.2 猪链球菌流行病学
        1.3.3 猪链球菌的危害
    1.4 猪链球菌2型表面蛋白SntA
2. 研究目的与意义
3 材料与方法
    3.1 材料
        3.1.1 引物设计与合成
        3.1.2 菌株与质粒
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 培养基、抗生素及其他试剂的配制
    3.2 方法
        3.2.1 RNA的提取
            3.2.1.2 猪cDNA的获得
            3.2.1.3 猪c1qA基因的获得及质粒pQE32的制备
            3.2.1.4 酶切与回收
            3.2.1.5 连接及转化
            3.2.1.6 重组质粒的酶切鉴定及测序验证
        3.2.2 蛋白质的表达与纯化
        3.2.3 BCA法测蛋白浓度
        3.2.4 SntA对IgG-C1qA结合的影响
        3.2.5 抗原-抗体复合物的制备
        3.2.6 SntA对C1q-抗原抗体复合物互作的影响
        3.2.7 SntA对C3沉积的影响
        3.2.8 Heme在SntA抑制补体经典激活途径中的作用
4 结果与分析
    4.1 猪C1qA基因的RT-PCR扩增
    4.2 猪C1qA基因的克隆与序列分析
    4.3 SntA和C1qA的表达及纯化
    4.4 SntA与猪IgG竞争性结合C1qA
    4.5 抗原抗体复合物的制备
    4.6 SntA抑制C1q与抗原抗体复合物的结合
    4.7 SntA抑制C3的生成
    4.8 Heme不直接介导SntA抑制补体经典激活途径
5 讨论
    5.1 SntA竞争性结合C1qA
    5.2 SntA抑制C1qA结合到抗原抗体复合物
    5.3 补体经典途径激活过程中的问题
    5.4 Heme在补体经典途径中的作用
结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪链球菌病[J]. 耿艳红,徐军,王兆山,李桂芹.  动物医学进展. 2005(09)
[2]补体系统 （文献综述）[J]. 朱锡华.  国外医学(免疫学分册). 1979(02)



本文编号：3305561