永生化绵羊附睾上皮细胞系的建立及其生物学特性分析

发布时间：2021-07-27 20:49

　　旨在建立绵羊附睾上皮永生化细胞系,为进一步研究绵羊附睾功能调节机制提供基础。本研究采用酶消化法分离培养原代绵羊附睾上皮细胞,利用脂质体将pCI-neo-hTERT质粒转入绵羊附睾上皮细胞（SEECs）,经G418筛选得到了细胞系hTERT-SEECs,免疫荧光法鉴定其角蛋白18（CK18）和人端粒酶逆转录亚基（hTERT）表达情况;RT-PCR检测其hTERT mRNA的表达;采用CCK-8法绘制细胞生长曲线检测其增殖能力;利用流式细胞仪检测其周期和细胞凋亡情况;核型分析检测其倍体情况;从mRNA和蛋白水平检测其谷胱甘肽过氧化物酶5（GPX5）和雄激素受体（AR）的表达情况。结果显示,原代绵羊附睾上皮细胞呈典型的铺路石状形态。hTERT成功转入绵羊附睾上皮细胞,传45代后,hTERT-SEECs仍呈铺路石状;hTERT-SEECs仍可稳定表达CK18和hTERT,并且拥有正常的二倍体核型;hTERT-SEECs增殖能力高于原代细胞,hTERT-SEECs处于G1期的细胞比例显著低于SEECs（P<0.05）,处于S期细胞比例显著高于SEECs（P<0.05）,且其活细胞率显... 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2019,50(09)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

图５ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ中的ｈＴＥＲＴ蛋白免疫荧光检测（４００×）Ｆｉｇ．５ＩｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｈＴＥＲＴｉｎｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ（４００×）

畜牧兽医学报５０卷图５ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ中的ｈＴＥＲＴ蛋白免疫荧光检测（４００×）Ｆｉｇ．５ＩｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｈＴＥＲＴｉｎｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ（４００×）Ａ．染色体排列图；Ｂ．ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ核型图Ａ．Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ；Ｂ．ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓｋａｒｙｏｔｙｐｅ图６ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ核型分析（４００×）Ｆｉｇ．６ＫａｒｙｏｔｙｐｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ（４００×）图７ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ和ＳＥＥＣｓ生长曲线Ｆｉｇ．７ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓａｎｄＳＥＥＣｓｇｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｓ化特性非常重要，任何细胞生长特性的变化都会对后续的试验结果产生显著影响［２５］。ｈＴＥＲＴ的ＲＴ－ＰＣＲ和免疫荧光染色结果显示，ｈＴＥＲＴ已成功转入细胞，并且在基因组中稳定表达。ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ角蛋白１８染色仍呈阳性，表明该细胞系有正常上皮细胞的表型特征。增殖活力是永生化细胞系最重要的特性之一。转染前后细胞增殖曲线形态均近似“Ｓ”型，ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ具有更高的生长速率。使用流式细胞仪进行细胞周期和细胞凋亡分析，结果显示，与ＳＥＥＣｓ相比，ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ处于Ｓ期的细胞比例、活细胞率均显著升高（Ｐ＜０．０５），处于Ｇ１期的细胞比例、凋亡率均显著降低（Ｐ＜０．０５）。综上所述，本研究所建立的ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ具有８２８１

【参考文献】：
期刊论文
[1]附睾小体功能蛋白及sRNA研究进展[J]. 肖娟,王讯,罗毅,李晓开,李学伟.  遗传. 2018(03)
[2]绒山羊附睾上皮细胞培养方法的建立及其生长特性[J]. 范晓梅,张通,栗瑞兰,边小娜,张家新.  畜牧兽医学报. 2017(07)
[3]永生化山羊子宫内膜上皮细胞系的建立及其生物学特性[J]. 吴庆侠,董海龙,刘忠艳,朱洪云.  中国农业大学学报. 2017(02)
[4]人类输卵管上皮永生化细胞系的建立及鉴定[J]. 高雯,臧荣余,王雁,杨丽娜,刘杨,亓子豪,尹胜,杨恭.  中国癌症杂志. 2013(04)
[5]山羊子宫内膜基质细胞永生化研究[J]. 盛宏霞,吴庆侠,靳亚平,秦新喜,董海龙.  畜牧兽医学报. 2009(06)

博士论文
[1]牛乳腺上皮细胞永生化及其多能性的研究[D]. 李吉霞.西北农林科技大学 2010



本文编号：3306518