猪瘟病毒与干扰素刺激基因15相互作用的探索

发布时间：2021-07-28 01:18

　　干扰素刺激基因15（ISG15）是一种类泛素蛋白,可在干扰素刺激下由isg15基因编码产生。其在序列、结构和功能上均与泛素类似,能够通过酶级联反应共价修饰靶蛋白。ISG15及其类泛素修饰系统参与免疫应答,是干扰素发挥抗病毒效应的重要途径。本研究利用重组猪IFN-α作为标准刺激物,验证了检测ISG15及ISG化方法的可行性,包括采用实时定量逆转录PCR（RQ-RT-PCR）检测ISG15转录水平;采用间接免疫荧光（IFA）、流式细胞术（FCM）和免疫印迹（WB）三种技术检测ISG15翻译水平;采用WB检测ISG15修饰水平。实验结果表明这些方法均能有效地检测ISG15及ISG化。通过上述方法的联合应用,本研究证实了猪瘟病毒感染可引起ISG15转录、翻译和修饰水平发生显著上调。以1moi猪瘟病毒感染PK-15细胞为例,使用RQ-RT-PCR可在病毒感染9、12、24和48 h后发现ISG15 mRNA分别上调15.89、65.80、121.94和128.89倍;使用IFA可在病毒感染9 h后观察到ISG15显著上调;使用FCM可在病毒感染6、12、24 h后发现ISG15阳性细胞率由0 h... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１?ＩＳＧ１５初级结构示意图??Ｆｉｇ．１－１?Ｔｈｅ?ｐｒｉｍａｒｙ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＩＳＧ１５??

ＩＦＮ－（３等保护性细胞因子表达。诱生的Ｉ型干扰素释放后，可与细胞膜表面的特异性受??体结合，活化ＭＫ／ＳＴＡＴ信号通路，表达包括ＩＳＧ１５在内的多种抗病毒蛋白，从而发挥??固有免疫的抗病毒效应（如图１－３所示）。??Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｒｔｘ??ＴＬＲ４?ｏｒ?Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ??＼?／?＾ｖＳ，ｎ？ｎ，?／?，一ｉｒｆ，??＼?（?＼?，ＫＫｙ?？现（??＾?／?／?二—ＩＫＫ－．?ｙ?＜－ＳＴＡＴ＾＞??ＩＫＫ－ｔ／．?Ｊ?ｙ??Ｃｙｔｏｐｌａｓｍ?ｊ?Ｖｎｆ－ｋＵ?衊?ｋ￣?）ＰＫＲ?＾??赢?ｃ－Ｊａｎ＞ＡＴＦ?２??ＩＫＫ３／３／７＾?????．．＊：：：：：：：：?＊＼Ｌ?＊３＾３?ＩＫ、火?ＪＦ?ＩＳＧＩ５．＜－／Ｖ／＊，；；：？＊：：；：．．＾??：？？？？？？？？？？？?＾?？?Ｉ￣?Ｉ￣＂??ＩＲＦ?ｓｉｔｅ?＼Ｐ?Ｉ?ｓｉｔｅ?ｋＩＩ?ｓｉｔｅ?ＩＳＫＥ??图１－３?ＩＳＧ１５表达调控示意图??Ｆｉｇ．?１－３?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＩＳＧ１５??（引自?ＬｉｕＸ?等［－１８］，ＤｏｙｌｅＳ［３９］）??当病毒侵袭细胞时，细胞可通过Ｔｏｌｌ样受体（Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ?ｒｅｃｅｐｔｏｒ，?ＴＬＲ）、视黄酸（维??甲酸）诱导基因蛋白１样受体（ＲＩＧ－Ｉ－ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＲＬＲ）、黑色素瘤分化相关基因５??（Ｍｅｌａｎｏｍａ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ?５，?ＭＤＡ－５?）和双链?ＲＮＡ?依

１．３．３?ＩＳＧ１５的类泛素膽系统??ＩＳＧ１５类泛素修饰系统与泛素－蛋白酶体系统类似，同样是一系列酶级联反应，可分??为两个阶段（如图１－４所示）。其中，ＩＳＧ１５通过双甘氨酸序列与靶蛋白结合，并进行共??价修饰的过程被称为ＩＳＧ化（ＩＳＧｙｌａｔｉｏｎ）：将ＩＳＧ１５从靶蛋白上移除的过程被称为去ＩＳＧ??化（ｄｅｌＳＧｙｌａｔｉｏｎ）。??［＂?Ｍ?ｙ－ＳＨ??ＶＢＰ４３（ＶＳＰ１Ｈ），?Ｗ?＜ｊｓｇＴＴ＞??Ｌ！ＳＰ２ＸＪＳＰ５，ＬＳＰ１３，?＾??ＬＳＰ１４９ｅｔａＬ?、?〇??（〇?（??響?ｆ?１?ＶＢＣＨ６，?Ｉ?ＢＣＨ８??（Ｉ＇ｒ．ｎ．ｉｉＭ?ＥＶ?Ｆ．ＦＰ（ＴＲ１Ｍ２Ｓ），?ＨＥＲＣＳ（ＣＥＲｌ）??图１－４?ＩＳＧ?１５类泛素修饰系统示意图??Ｆｉｇ．?１－４?Ｔｈｅ?ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｌｉｋｅ?ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｓｙｓｔｅｍ?ｏｆ?ＩＳＧ?１５??（引自?Ｐｉｔｈａ－Ｒｏｗｅ?Ｉ?Ｆ?等【３３】，Ｊｅｏｎ?Ｙ?Ｊ?等［５２】）??参与ＩＳＧ化过程的酶类包括类泛素Ｅｌ激活酶、类泛素Ｅ２结合酶和类泛素Ｅ３连接??酶，而进行去ＩＳＧ化则为一系列解聚酶［５３］。经研究鉴定，ＵＢＥ１Ｌ是类泛素Ｅ１激活酶，??ＵＢＣＨ６?和?ＵＢＣＨ８?是类泛素?Ｅ２?结合酶［３３］，ＥＰＦ［５４】、ＨＥＲＣ５［２４］＾ａＴＲＩＭ２５?是类泛素?Ｅ３??连接酶


本文编号：3306910