鸡IL-10单抗的制备及不同B单倍型鸡血清学方法的建立

发布时间：2021-07-28 02:20

　　白细胞介素-10（Interleukin10，IL-10）是一种由多种细胞产生的免疫调节性细胞因子，主要生物学功能是限制和终止炎症反应，调控一些免疫细胞的分化和增殖。鸡白细胞介素10（ChIL-10）基因编码175个氨基酸，与人和小鼠IL-10的核苷酸同源性分别为45%和42%，有与哺乳动物IL-10蛋白相似的生物学功能。本研究以不同浓度的脂多糖（LPS）和刀豆素A（ConA）分别刺激体外分离培养的鸡脾脏和外周血淋巴细胞（PBL），提取细胞总RNA，经RT-PCR扩增成熟ChIL-10蛋白的编码产物，并以pET-30a（+）为原核表达载体成功构建原核重组质粒pET-ChIL-10，转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达后获得大小约为26kDa以包涵体形式存在的ChIL-10重组蛋白。切取经SDS-PAGE后重组蛋白所在凝胶，研磨后免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠，制备了兔抗ChIL-10血清和鼠抗ChIL-10血清。设计两对真核表达系统引物，分别扩增ChIL-10全长编码区（CDS）基因（ChIL-10F）和成熟蛋白CDS区基因（ChIL-10M）（去信号肽），以含有嘌呤... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ChIL-10基因的PCR扩增产物

的鉴定重组质粒，EcoR Ⅰ和X473 bp，与pET-30a载体IL-10中目的基因的核苷0 的双酶切产物；M：D EcoR Ⅰ /Xho Ⅰ; M: DL组质粒 pMD-ChIL-10 的gestion analysis of the rec1 M20000400700bp

3.1.2.2 重组质粒 pET-ChIL-10 的鉴定提取与pET-30a载体连接后的重组质粒，EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切产物电泳结果表明，所得两条片段大小分别为5400 bp和473 bp，与pET-30a载体和ChIL-10的大小相符，如图3-3。且测序结果显示，重组质粒pET-ChIL-10中目的基因的核苷酸序列与参考序列完全一致。3.1.3 ChIL-10 重组蛋白的 SDS-PAGE 分析3.1.3.1 pET-ChIL-10 重组菌的诱导pET-ChIL-10 的 SDS-PAGE 电泳结果表明，pET-ChIL-10 重组菌在分子量约 26 kDa 处有一条明显的特异性蛋白条带，与 ChIL-10 重组蛋白预期分子量大小一致，未诱导菌在相同位1：pMD-ChIL-10 的双酶切产物；M：DNA 分子质量标准1: pMD-ChIL-10 by EcoR Ⅰ /Xho Ⅰ; M: DL 10 000 DNA Marker图 3-2 重组质粒 pMD-ChIL-10 的双酶切鉴定Fig. 3-2 Restriction enzyme digestion analysis of the recombinant plasmid pMD-ChIL-1020005004000100047327001 M250bp1：pET-ChIL-10 的双酶切产物；M：DNA 分子质量标准1: pET-ChIL-10by EcoR Ι/Xho Ι; M: DL2 000 DNA Marker图 3-3 重组质粒 pET-ChIL-10 的双酶切鉴定Fig. 3-3 Re


本文编号：3307001