猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9纳米抗体在体内抗病毒感染的初步验证
发布时间：2021-07-28 11:14
猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种以怀孕母猪流产和不同年龄段猪的呼吸道疾病为临床特征的病毒性传染病。PRRSV具有逃逸宿主体液免疫应答机制等特征,导致现阶段商品化的疫苗不能给猪群提供完全的保护作用,且目前尚未得知有效的治疗方法,该病给我国养猪业带来巨大的经济损失。前期研究中,本实验室将PRRSV非结构蛋白Nsp9特异性纳米抗体Nb6基因通过（G4S）3 Linker与细胞穿膜肽TAT基因融合,克隆至pET21b载体,成功构建pET21b-TAT-Nb6表达载体。原核表达获得的TAT-Nb6重组蛋白具有与Nsp9重组蛋白相互作用的活性,并且能够进入MARC-145细胞和原代细胞PAM中,可以抑制多株PRRSV毒株（包括基因1型（GZ11-G1）与2型（SD16、JX-A1、GD-HD、VR-2332））在以上两种细胞中的复制（Wang et al.2019）。因此,TAT-Nb6具有开发为新型抗PRRSV纳米抗体药物的潜力。基于以上背景,本研究通过对TAT-Nb6诱导表达温度、IPTG添加量和诱导表...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文献综述
第一章 猪繁殖与呼吸综合征病的研究进展
1.1 猪繁殖与呼吸综合征病简介
1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒简介
1.3 猪繁殖与呼吸综合征病临床症状
1.4 猪繁殖与呼吸综合征病诊断方法
1.4.1 临床诊断
1.4.2 病毒分离与鉴定
1.4.3 免疫学诊断
1.4.4 分子生物学诊断
1.5 猪繁殖与呼吸综合征病防控现状
第二章 纳米抗体的研究进展
2.1 纳米抗体结构特征
2.2 纳米抗体的特点
2.3 纳米抗体的应用
2.3.1 纳米抗体作为研究工具
2.3.2 纳米抗体在检测中的应用
2.3.3 纳米抗体在疾病治疗中应用
第三章 细胞穿模肽的研究进展
本研究的目的与意义
试验研究
第四章 TAT-Nb6 重组蛋白表达条件优化及大量制备
4.1 材料
4.1.1 菌液
4.1.2 主要耗材与试剂
4.2 方法
4.2.1 TAT-Nb6 重组蛋白表达条件的优化
4.2.2 TAT-Nb6 重组蛋白大量制备
4.2.3 TAT-Nb6 重组蛋白复性及浓缩
4.2.4 TAT-Nb6 重组蛋白活性鉴定
4.2.5 TAT-Nb6 重组蛋白在猪组织中分布的研究
4.3 结果
4.3.1 TAT-Nb6 重组蛋白表达条件的优化
4.3.2 TAT-Nb6 重组蛋白的纯化
4.3.3 TAT-Nb6 重组蛋白的复性与浓缩
4.3.4 TAT-Nb6 重组蛋白活性鉴定
4.3.5 TAT-Nb6 重组蛋白在猪组织中分布的研究
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 TAT-Nb6 在体内抗PRRSV感染作用的验证
5.1 材料
5.1.1 病毒和实验动物
5.1.2 主要耗材与试剂
5.2 方法
5.2.1 TAT-Nb6 重组蛋白内毒素检测
5.2.2 实验方案
5.2.3 检测指标
5.3 结果
5.3.1 TAT-Nb6 蛋白内毒素检测
5.3.2 临床表现及体温测量
5.3.3 PRRSV病毒血症
5.3.4 PRRSV抗体水平
5.4 讨论
5.5 小结
结论
附录 A 主要实验仪器
附录 B 主要试剂配制
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪蓝耳病的研究进展[J]. 陈泽芳,赵爱莉. 畜禽业. 2017(03)
[2]浅谈猪繁殖与呼吸综合症免疫学机理[J]. 谷臣君,白智轲,陈兴才. 中国畜禽种业. 2015(06)
[3]Porcine reproductive and respiratory syndrome virus vaccines: Immunogenicity, efficacy and safety aspects[J]. Wasin Charerntantanakul. World Journal of Virology. 2012(01)
[4]猪繁殖与呼吸综合征的研究进展[J]. 张洋,李晓叶. 湖北畜牧兽医. 2010(07)
[5]猪繁殖与呼吸综合征防控方法研究进展[J]. 胡奕,宋杰,赵宝华. 动物医学进展. 2009(02)
[6]高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立[J]. 郝晓芳,周艳君,田志军,韦天超,安同庆,彭金美,华荣虹,童光志. 中国预防兽医学报. 2007(09)
[7]高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其分子流行病学分析[J]. 童光志,周艳君,郝晓芳,田志军,仇华吉,彭金美,安同庆. 中国预防兽医学报. 2007(05)
[8]猪繁殖与呼吸综合征病毒形态学特征[J]. 李成,李六金,谷守林,蔡虹,姜焕宏,赵世君,张海,李秦. 畜牧兽医学报. 2001(06)
[9]猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与初步鉴定[J]. 杨汉春,管山红,尹晓敏,甘孟侯. 中国兽医杂志. 1997(10)
硕士论文
[1]PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及应用[D]. 谭斌.新疆农业大学 2006
本文编号：3307809
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文献综述
第一章 猪繁殖与呼吸综合征病的研究进展
1.1 猪繁殖与呼吸综合征病简介
1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒简介
1.3 猪繁殖与呼吸综合征病临床症状
1.4 猪繁殖与呼吸综合征病诊断方法
1.4.1 临床诊断
1.4.2 病毒分离与鉴定
1.4.3 免疫学诊断
1.4.4 分子生物学诊断
1.5 猪繁殖与呼吸综合征病防控现状
第二章 纳米抗体的研究进展
2.1 纳米抗体结构特征
2.2 纳米抗体的特点
2.3 纳米抗体的应用
2.3.1 纳米抗体作为研究工具
2.3.2 纳米抗体在检测中的应用
2.3.3 纳米抗体在疾病治疗中应用
第三章 细胞穿模肽的研究进展
本研究的目的与意义
试验研究
第四章 TAT-Nb6 重组蛋白表达条件优化及大量制备
4.1 材料
4.1.1 菌液
4.1.2 主要耗材与试剂
4.2 方法
4.2.1 TAT-Nb6 重组蛋白表达条件的优化
4.2.2 TAT-Nb6 重组蛋白大量制备
4.2.3 TAT-Nb6 重组蛋白复性及浓缩
4.2.4 TAT-Nb6 重组蛋白活性鉴定
4.2.5 TAT-Nb6 重组蛋白在猪组织中分布的研究
4.3 结果
4.3.1 TAT-Nb6 重组蛋白表达条件的优化
4.3.2 TAT-Nb6 重组蛋白的纯化
4.3.3 TAT-Nb6 重组蛋白的复性与浓缩
4.3.4 TAT-Nb6 重组蛋白活性鉴定
4.3.5 TAT-Nb6 重组蛋白在猪组织中分布的研究
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 TAT-Nb6 在体内抗PRRSV感染作用的验证
5.1 材料
5.1.1 病毒和实验动物
5.1.2 主要耗材与试剂
5.2 方法
5.2.1 TAT-Nb6 重组蛋白内毒素检测
5.2.2 实验方案
5.2.3 检测指标
5.3 结果
5.3.1 TAT-Nb6 蛋白内毒素检测
5.3.2 临床表现及体温测量
5.3.3 PRRSV病毒血症
5.3.4 PRRSV抗体水平
5.4 讨论
5.5 小结
结论
附录 A 主要实验仪器
附录 B 主要试剂配制
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪蓝耳病的研究进展[J]. 陈泽芳,赵爱莉. 畜禽业. 2017(03)
[2]浅谈猪繁殖与呼吸综合症免疫学机理[J]. 谷臣君,白智轲,陈兴才. 中国畜禽种业. 2015(06)
[3]Porcine reproductive and respiratory syndrome virus vaccines: Immunogenicity, efficacy and safety aspects[J]. Wasin Charerntantanakul. World Journal of Virology. 2012(01)
[4]猪繁殖与呼吸综合征的研究进展[J]. 张洋,李晓叶. 湖北畜牧兽医. 2010(07)
[5]猪繁殖与呼吸综合征防控方法研究进展[J]. 胡奕,宋杰,赵宝华. 动物医学进展. 2009(02)
[6]高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立[J]. 郝晓芳,周艳君,田志军,韦天超,安同庆,彭金美,华荣虹,童光志. 中国预防兽医学报. 2007(09)
[7]高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其分子流行病学分析[J]. 童光志,周艳君,郝晓芳,田志军,仇华吉,彭金美,安同庆. 中国预防兽医学报. 2007(05)
[8]猪繁殖与呼吸综合征病毒形态学特征[J]. 李成,李六金,谷守林,蔡虹,姜焕宏,赵世君,张海,李秦. 畜牧兽医学报. 2001(06)
[9]猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与初步鉴定[J]. 杨汉春,管山红,尹晓敏,甘孟侯. 中国兽医杂志. 1997(10)
硕士论文
[1]PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及应用[D]. 谭斌.新疆农业大学 2006
本文编号：3307809
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