小反刍兽疫病毒疫苗株N和M基因的克

发布时间：2021-07-30 07:04

　　根据GenBank已登录的PPRV基因组序列,设计并合成2对特异性引物,以PPRV疫苗株基因组为模板,经RT-PCR扩增获得N和M基因并进行序列分析,再将2个基因插入到原核表达载体pET-28a中,经鉴定正确后转化BL21感受态细胞进行IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE和Western blot检测。成功克隆PPRV疫苗株N和M基因,重组菌经IPTG诱导后表达分子质量为57.7ku N蛋白（核衣壳蛋白）和38.1ku的M蛋白（基质蛋白）,2个蛋白均能与小反刍兽疫阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。 

【文章来源】：西北农业学报. 2017,26(02)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

图１Ｎ和Ｍ基因的扩增Ｍ．ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；１．Ｎ基因扩增产物Ａｍｐｌｉｆｉｃａ－ｔｉｏｎｏｆＮｇｅｎｅ；２．Ｍ基因扩增产物ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭｇｅｎｅ

１５ｍｉｎ。ＥＣＬ反应液孵育ＰＶＤＦ膜，暗室压片曝光。同时设立阴性对照。２结果与分析２．１ＰＣＲ扩增结果以ＰＰＲＶ疫苗株（Ｎｉｇｅｒｉａ７５／１株）提取的ＲＮＡ为模板，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增得到１５７８ｂｐ的Ｎ基因和１００８ｂｐ的Ｍ基因，与预期大小相符（图１）。Ｍ．ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；１．Ｎ基因扩增产物Ａｍｐｌｉｆｉｃａ－ｔｉｏｎｏｆＮｇｅｎｅ；２．Ｍ基因扩增产物ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭｇｅｎｅ图１Ｎ和Ｍ基因的扩增Ｆｉｇ．１ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＮａｎｄＭｇｅｎｅｂｙＰＣＲ２．２原核重组质粒的鉴定重组质粒ｐＥＴ２８ａ－Ｎ经ＥｃｏＲⅠ和ＸｈｏⅠ双酶切鉴定，琼脂糖凝胶电泳后出现１５７８ｂｐ的目的条带和５３６９ｂｐ的载体条带。重组质粒ｐＥＴ２８ａ－Ｍ经ＢａｍＨⅠ和ＸｈｏⅠ双酶切鉴定，琼脂糖凝胶电泳后出现１００８ｂｐ的目的条带和５３６９ｂｐ的载体条带。同时双酶切ｐＥＴ－２８ａ载体·１８０·西北农业学报２６卷

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株M蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备和初步应用[D]. 黄华欣.中国农业科学院 2013



本文编号：3310949