PHEV感染小鼠大脑皮质mRNA和microRNA表达谱变化及其诱导细胞凋亡机制的研究

发布时间：2021-08-01 19:05

　　猪血凝性脑脊髓炎病毒（Porcine Hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV）属于冠状病毒科β-冠状病毒属成员，为不分段的单股正链RNA病毒，可引起仔猪发生猪血凝性脑脊髓炎（Porcine Hemagglutinating encephalomyelitis，PHE）。PHE是一种急性、高度接触性传染病临床上，以仔猪呕吐、衰竭、下痢或/和明显的神经症状为主要特征，死亡率高达20%-100%。该病一旦暴发流行，其危害十分严重。microRNA（miRNA）是发现于真核生物中的一类非编码小分子单链RNA，在细胞的基因表达调控中发挥重要的作用。而在病毒感染细胞过程中miRNA的表达变化往往与病毒的致病性相关。因此，miRNA的发现为研究PHEV的致病机制提供了新的研究思路也为PHE的防控提供了新的方向。近年来，小鼠作为最佳动物模型已经广泛应用于PHEV致病机制的研究。而PHEV具有嗜神经性，能够侵害小鼠的中枢神经系统，对小鼠大脑皮质造成损伤。另一方面，大脑皮质是一个富含miRNA的器官。因此，在PHEV侵害大脑皮质过程中许多基因表达变化的同... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：119 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

PHEV感染后第5d小鼠大脑皮质区H&E染色观察Fig1.2.Histopathologicalexaminationintheregionofcerebralcortexin5dpi.1.2.3PHEV感染小鼠后不同时间段大脑皮质区病毒的分布和含量的变化

脑皮质组织区能检测到少量病毒抗原的分布（呈现的绿色荧光为病毒抗原被FITC标记后的阳性信号）。到感染后第5d时检测到病毒表达的抗原蛋白逐渐增加，并且广泛分布于感染小鼠的大脑皮质组织（图1.3）。此外，提取小鼠大脑皮质的总RNA，应用Real-time PCR相对定量的方法分析病毒基因组RNA含量的变化，结果表明：PHEV感染小鼠第3dPHEV基因组RNA相对表达量变化显著（P<0.05），而到第4d和第5d病毒基因组RNA表达量升高极显著(P<0.01)（图1.4和图1.5）。

5 PHEV感染小鼠后在大脑皮质区不同时间段病毒基因组RNA的变uantities of PHEV genomic RNA at different time post infection in mice cerebraHEV感染小鼠不同时间段大脑皮质区细胞因子TNF-a和IFN-r含量得到小鼠大脑皮质后，加入PBS，冰上匀浆，4 ℃ 900g离心10min10%的匀浆液，并应用ELISA方法检测大脑皮质组织细胞因子的：与对照相比，PHEV感染后第第3d小鼠的细胞因子TNF-a变化不-r的表达量显著升高（P<0.05）；与对照相比，PHEV感染后第5dTNF-a和IFN-r均显著升高（P<0.05）（图1.6）。结果表明：PHEV脑皮质区出现了炎症反应。


本文编号：3316079