坦布苏病毒NS3蛋白互作宿主蛋白的筛
发布时间：2021-08-01 21:32
NS3蛋白是坦布苏病毒（Duck Tembusu virus,TMUV）非结构蛋白中的重要成员,其包含三个结构域S7、DEXDc和HELICc,每个结构域各自分别具有丝氨酸蛋白酶,核苷酸三磷酸酶和RNA解旋酶活性,其具有多种生物学功能,参与病毒生命周期调控和宿主内抗病毒免疫反应。基于酵母双杂交系统,在本研究中,先将构建好的阳性重组质粒pGBKT7-NS3转化到酵母Y2H菌株中,证明它没有自激活能力和毒性,表明诱饵酵母菌已经准备完成,可以进行后续的筛选工作。将复苏后的鸭胚成纤维细胞cDNA文库的猎物酵母菌株与诱饵酵母菌株进行杂交混合培养,得到诱饵与猎物质粒共同存在的杂合二倍体酵母细胞。杂交后在营养缺陷型培养基上进行不同强度层次的筛选,先在低筛选强度的SD/-Trp/-Leu培养皿上进行筛选,以获得较多无表型且生长状态良好的酵母菌落,一对一进行转板,用较高筛选强度的DDO/X/A培养皿筛选出蓝色阳性克隆,再一对一转板到QDO/X/A上进行高筛选力培养,挑取阳性克隆接种到QDO/X/A重复筛选,以此得到更多、更为准确且重复性更高的阳性结果。与NCBI数据库比对,提示筛选出了七种与NS3存在潜...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TMUV基因组结构图
坦布苏病毒 NS3 蛋白互作宿主蛋白的筛选、验证反应中的活跃程度（Gebhard et al., 2012）；其中，用伴随其锚定到内质网上，从而促进 NS3 解旋酶的解旋率（Shiryaev et al., 2009）。它同时又可以协NA 依赖性 RNA 聚合酶（RNA-dependent RNA p程中，它能够协助分离瞬时形成的 dsRNA 中间体。三者的复合物，在 DENV 感染的宿主细胞内能够协W lk B et al., 2012）；也有相关研究显示 NS3 蛋白，被归为类似前凋亡蛋白，以触发宿主细胞凋亡，
一种蛋白质-蛋白质复合物，则在空间上重构这两个结构域，由此可告基因的转录（Wang et al., 2018）。将重构后的对应载体分别转化进系统中，如果诱饵和猎物相互作用，DNA-BD 结合域识别后并锚定，而此时与之互作的 pGal4 激活域能转录激活 UAS 启动子所控制编基因。四种常用的报告基因是 AUR1-C、ADE2、HIS3 和 MEL1，他达，可以使酵母菌具备在营养缺陷培养基上仍能正常生长的特性。为筛选到的假阳性克隆，培养基中加入 X-α-Gal，可使 LacZ 表达之后显行分辨和筛选（Walhout et al., 2001）。双杂交技术近年来已被广泛应用于蛋白研究领域，渐渐成为发现和研和蛋白质之间相互作用的基础平台。酵母双杂交系统建立在真核生物白质-蛋白质相互作用，即使是蛋白质之间短暂存在的微弱瞬时效应因产物被敏感地检测到，该技术原理简单，应用广泛，这将为相关研面上的支持（Hamdi et al., 2012）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PRDX家族蛋白与肿瘤的发生发展[J]. 吕丽娜,黄赞松,王小超. 右江民族医学院学报. 2018(02)
[2]NALP3炎性复合体及p38 MAPK信号通路在氧化应激中的作用及阿魏酸钠的干预机制[J]. 汪莲,谢敏,况菊. 四川大学学报(医学版). 2018(02)
[3]稳定过表达人MGST1基因抑制肺腺癌细胞SPC-A-1的凋亡[J]. 曾宝真,葛春蕾,付桥粉,张志伟,宋鑫,黄文华. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2017(06)
[4]坦布苏病毒在种鸭中的垂直传播[J]. 张英,赵丹丹,刁有祥,陈浩,提金凤,张璐,杨国平. 中国兽医学报. 2016(11)
[5]过氧化物还原酶在MAPK信号通路中的调节作用[J]. 郭芳,符民桂,姜志胜. 中国动脉硬化杂志. 2016(11)
[6]鸡病防控中的主要生物安全措施[J]. 王宗海. 养禽与禽病防治. 2014(12)
[7]探针检测鸭黄病毒的地高辛标记DNA的制备与应用[J]. 高绪慧,刁有祥,唐熠,于春梅,张大丙,岳澄滨. 中国兽医学报. 2012(04)
[8]鸭坦布苏病毒研究进展[J]. 朱丽萍,颜世敢. 中国预防兽医学报. 2012(01)
[9]坦布苏病毒致病特性及其流行病学[J]. 万春和,黄瑜. 动物医学进展. 2011(12)
[10]鸭坦布苏病毒病病原的分离鉴定及生物学特性研究[J]. 李泽君. 中国家禽. 2011(17)
博士论文
[1]鸭坦布苏病毒细胞适应毒免疫原性及致弱分子基础研究[D]. 章丽娇.中国农业大学 2017
[2]PRDX3和UNG1在氧化应激中相互作用的机制研究[D]. 刘志磊.清华大学 2016
[3]过氧化物酶6（Peroxiredoxin 6）在肝细胞肝癌中的表达和作用机制研究[D]. 鲁迪.浙江大学 2016
[4]坦布苏病毒ZC株感染性克隆的构建和部分3’非编码区功能的初步研究[D]. 陈浩.山东农业大学 2015
[5]鸭坦布苏病毒生物学特性、基因组特征、诊断方法以及感染性克隆的研究[D]. 于可响.扬州大学 2013
[6]坦布苏病毒的分离鉴定及重组腺病毒介导shRNA抑制坦布苏病毒在体外复制的研究[D]. 唐熠.山东农业大学 2013
[7]丙型肝炎病毒非结构蛋白3解旋酶保守性表位单克隆抗体及其意义[D]. 边奕鑫.南方医科大学 2013
硕士论文
[1]鸭坦布苏病毒核酸免疫的初步建立[D]. 张泽.山东农业大学 2018
[2]p38MAPK和JNK信号通路在甲状腺功能减退雄性大鼠睾丸线粒体氧化应激中的作用研究[D]. 常晓茹.兰州大学 2018
[3]日本乙型脑炎病毒NS4B蛋白与NS3解旋酶的相互作用研究[D]. 吕博敏.华中农业大学 2017
[4]MGST1抑制肺腺癌细胞的凋亡及其机制研究[D]. 曾宝真.南方医科大学 2017
[5]利用酵母双杂交系统筛选PEDV蛋白间互作及与nsp14、nsp16互作的宿主蛋白[D]. 焦永.华中农业大学 2016
[6]乙型脑炎病毒NS1蛋白的宿主互作蛋白筛选与鉴定[D]. 周玉鹏.四川农业大学 2016
[7]基于转录组分析的PUB蛋白与甘蓝S-位点受体激酶的相互作用研究[D]. 毕云龙.西南大学 2016
[8]坦布苏病毒对樱桃谷育成鸭的致病性研究[D]. 路云建.山东农业大学 2016
[9]稳定表达乙型脑炎病毒NS2B/NS4B细胞系的构建及其在筛选互作蛋白中的初步应用[D]. 徐秋萍.华中农业大学 2015
[10]坦布苏病毒NS5蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及快速检测胶体金试纸条方法的建立[D]. 杨国平.山东农业大学 2015
本文编号：3316282
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TMUV基因组结构图
坦布苏病毒 NS3 蛋白互作宿主蛋白的筛选、验证反应中的活跃程度（Gebhard et al., 2012）；其中，用伴随其锚定到内质网上，从而促进 NS3 解旋酶的解旋率（Shiryaev et al., 2009）。它同时又可以协NA 依赖性 RNA 聚合酶（RNA-dependent RNA p程中，它能够协助分离瞬时形成的 dsRNA 中间体。三者的复合物，在 DENV 感染的宿主细胞内能够协W lk B et al., 2012）；也有相关研究显示 NS3 蛋白，被归为类似前凋亡蛋白，以触发宿主细胞凋亡，
一种蛋白质-蛋白质复合物，则在空间上重构这两个结构域，由此可告基因的转录（Wang et al., 2018）。将重构后的对应载体分别转化进系统中，如果诱饵和猎物相互作用，DNA-BD 结合域识别后并锚定，而此时与之互作的 pGal4 激活域能转录激活 UAS 启动子所控制编基因。四种常用的报告基因是 AUR1-C、ADE2、HIS3 和 MEL1，他达，可以使酵母菌具备在营养缺陷培养基上仍能正常生长的特性。为筛选到的假阳性克隆，培养基中加入 X-α-Gal，可使 LacZ 表达之后显行分辨和筛选（Walhout et al., 2001）。双杂交技术近年来已被广泛应用于蛋白研究领域，渐渐成为发现和研和蛋白质之间相互作用的基础平台。酵母双杂交系统建立在真核生物白质-蛋白质相互作用，即使是蛋白质之间短暂存在的微弱瞬时效应因产物被敏感地检测到，该技术原理简单，应用广泛，这将为相关研面上的支持（Hamdi et al., 2012）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PRDX家族蛋白与肿瘤的发生发展[J]. 吕丽娜,黄赞松,王小超. 右江民族医学院学报. 2018(02)
[2]NALP3炎性复合体及p38 MAPK信号通路在氧化应激中的作用及阿魏酸钠的干预机制[J]. 汪莲,谢敏,况菊. 四川大学学报(医学版). 2018(02)
[3]稳定过表达人MGST1基因抑制肺腺癌细胞SPC-A-1的凋亡[J]. 曾宝真,葛春蕾,付桥粉,张志伟,宋鑫,黄文华. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2017(06)
[4]坦布苏病毒在种鸭中的垂直传播[J]. 张英,赵丹丹,刁有祥,陈浩,提金凤,张璐,杨国平. 中国兽医学报. 2016(11)
[5]过氧化物还原酶在MAPK信号通路中的调节作用[J]. 郭芳,符民桂,姜志胜. 中国动脉硬化杂志. 2016(11)
[6]鸡病防控中的主要生物安全措施[J]. 王宗海. 养禽与禽病防治. 2014(12)
[7]探针检测鸭黄病毒的地高辛标记DNA的制备与应用[J]. 高绪慧,刁有祥,唐熠,于春梅,张大丙,岳澄滨. 中国兽医学报. 2012(04)
[8]鸭坦布苏病毒研究进展[J]. 朱丽萍,颜世敢. 中国预防兽医学报. 2012(01)
[9]坦布苏病毒致病特性及其流行病学[J]. 万春和,黄瑜. 动物医学进展. 2011(12)
[10]鸭坦布苏病毒病病原的分离鉴定及生物学特性研究[J]. 李泽君. 中国家禽. 2011(17)
博士论文
[1]鸭坦布苏病毒细胞适应毒免疫原性及致弱分子基础研究[D]. 章丽娇.中国农业大学 2017
[2]PRDX3和UNG1在氧化应激中相互作用的机制研究[D]. 刘志磊.清华大学 2016
[3]过氧化物酶6（Peroxiredoxin 6）在肝细胞肝癌中的表达和作用机制研究[D]. 鲁迪.浙江大学 2016
[4]坦布苏病毒ZC株感染性克隆的构建和部分3’非编码区功能的初步研究[D]. 陈浩.山东农业大学 2015
[5]鸭坦布苏病毒生物学特性、基因组特征、诊断方法以及感染性克隆的研究[D]. 于可响.扬州大学 2013
[6]坦布苏病毒的分离鉴定及重组腺病毒介导shRNA抑制坦布苏病毒在体外复制的研究[D]. 唐熠.山东农业大学 2013
[7]丙型肝炎病毒非结构蛋白3解旋酶保守性表位单克隆抗体及其意义[D]. 边奕鑫.南方医科大学 2013
硕士论文
[1]鸭坦布苏病毒核酸免疫的初步建立[D]. 张泽.山东农业大学 2018
[2]p38MAPK和JNK信号通路在甲状腺功能减退雄性大鼠睾丸线粒体氧化应激中的作用研究[D]. 常晓茹.兰州大学 2018
[3]日本乙型脑炎病毒NS4B蛋白与NS3解旋酶的相互作用研究[D]. 吕博敏.华中农业大学 2017
[4]MGST1抑制肺腺癌细胞的凋亡及其机制研究[D]. 曾宝真.南方医科大学 2017
[5]利用酵母双杂交系统筛选PEDV蛋白间互作及与nsp14、nsp16互作的宿主蛋白[D]. 焦永.华中农业大学 2016
[6]乙型脑炎病毒NS1蛋白的宿主互作蛋白筛选与鉴定[D]. 周玉鹏.四川农业大学 2016
[7]基于转录组分析的PUB蛋白与甘蓝S-位点受体激酶的相互作用研究[D]. 毕云龙.西南大学 2016
[8]坦布苏病毒对樱桃谷育成鸭的致病性研究[D]. 路云建.山东农业大学 2016
[9]稳定表达乙型脑炎病毒NS2B/NS4B细胞系的构建及其在筛选互作蛋白中的初步应用[D]. 徐秋萍.华中农业大学 2015
[10]坦布苏病毒NS5蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及快速检测胶体金试纸条方法的建立[D]. 杨国平.山东农业大学 2015
本文编号：3316282
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