卵泡抑素对猪着床前胚胎体外发育的影响
发布时间：2021-08-02 03:11
猪胚胎工程在畜牧业、医学、生物学基础研究等方面均具有重要的科学意义和广阔的应用前景。但作为影响猪胚胎早期发育效率与质量的关键环节之一,猪胚胎体外培养体系仍然不理想。已知作为TGF-P超家族的一员,卵泡抑素（Follistatin, FST）可有效地促进牛和猴子早期胚胎的发育。然而FST对猪早期胚胎发育是否有作用鲜有报道。为了深入探讨FST对猪早期胚胎体外发育的影响,完善猪胚胎体外培养方案,本研究开展了如下试验：试验一：为了探明FST对体外胚胎形成可能的分子机制,我们检测了猪卵母细胞和不同发育阶段的猪孤雌激活胚（parthenogenetic activation embryo, PAE）>体外受精胚（in vitro fertilization embyo, IVFE）中 FST mRNA的表达丰度及其蛋白的动态表达模式。实时荧光定量PCR （Real-time Quantitative PCR, RT-qPCR）结果显示,猪卵母细胞和早期胚胎的各个发育阶段均有FST mRNA的表达。FST mRNA随着成熟时间的延长而缓慢上升,在PAEs和IVFEs的2、4和8-cell阶段表...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
文献综述
1. 猪胚胎体外培养的研究进展
1.1 猪胚胎体外培养的简要回顾
1.2 胚胎体外培养的应用前景
1.3 影响猪胚胎体外培养的因素
1.3.1 卵母细胞来源
1.3.2 筛选优质的卵母细胞
1.3.3 卵母细胞的体外成熟
1.3.4 胚胎培养基
1.3.5 培养添加物
1.3.6 培养气相
2. 卵泡抑素(Follistatin,FST)的研究进展
2.1 FST基因的结构定位
2.2 FST组织分布及表达
2.3 FST的生物学作用
2.3.1 FST的结合作用
2.3.2 不同FST蛋白亚型表现出不同的生物学功能
2.3.3 FST对卵泡发育和卵母细胞成熟的影响
2.3.4 FST在胚胎发育及分化过程中的作用
结语
引言
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 材料
1.1.2 主要仪器
1.1.3 主要耗材
1.1.4 所需试剂及溶液配制
1.2 试验方法
1.2.1 猪卵母细胞体外成熟
1.2.2 脱卵丘
1.2.3 猪卵母细胞孤雌激活
1.2.4 猪卵母细胞体外受精
1.2.5 传统猪体细胞核移植技术
1.2.6 间接免疫荧光染色技术
1.2.7 猪卵母细胞及胚胎的RNA提取及反转录
1.2.8 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)
1.2.9 统计分析
1.3 试验设计
2 结果
2.1 猪卵母细胞和早期胚胎中FST mRNA和蛋白的动态表达模式
2.1.1 猪卵母细胞和着床前胚胎各个发育阶段FST mRNA的表达丰度
2.1.2 猪卵母细胞和早期胚胎各个发育阶段FST蛋白的动态表达
2.2 添加不同亚型FST蛋白对猪PAEs着床前体外发育的影响
2.2.1 添加不同亚型FST蛋白对早期卵裂率和总卵裂率的影响
2.2.2 在不同阶段添加不同亚型FST对于猪PAEs囊胚形成率及囊胚质量的影响
2.3 添加不同浓度FST-315蛋白对猪PAEs、NTEs着床前体外发育的影响
2.3.1 添加不同浓度FST-315蛋白对猪PAEs着床前体外发育的影响
2.3.2 添加不同浓度FST-315蛋白对猪NTEs着床前体外发育的影响
2.4 不同时间添加FST-300蛋白对猪PAEs着床前体外发育的影响
2.5 添加不同浓度FST-300蛋白对猪NTEs着床前体外发育的影响
3 讨论
3.1 关于FST mRNA和蛋白在早期胚胎中的表达
3.2 关于不同亚型FST蛋白的作用
3.3 关于FST蛋白的添加时间
4 结论
参考文献
致谢
个人简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]亮甲酚蓝染色筛选及曲古抑菌素A对东北野猪核移植胚发育的影响[J]. 付博,刘娣,马红,何鑫淼,吴赛辉,马建章,安铁洙. 农业生物技术学报. 2012(08)
[2]Relationship Between Differential Expression of Bax and Bcl-2 Genes and Developmental Differences of Porcine Parthenotes Cultured in PZM-3 and NCSU-23[J]. CUI Mao-sheng1,2*,LIU Zhen-xing1*,WANG Xian-long1,ZHANG Jing1,WU Yi1,HAN Guo-cai1 and ZENG Shen-ming1 1 Laboratory of Animal Embryonic Biotechnology,College of Animal Science and Technology,China Agricultural University,Beijing 100193,P.R.China2 Tianjin Institute of Animal Science,Tianjin 300112,P.R.China. Agricultural Sciences in China. 2011(11)
[3]初次卵裂时间是猪克隆胚胎发育潜能的重要标识[J]. 罗学明,肖炜,冯冲,龙川,闫军,薛振华,云鹏,潘登科. 生物化学与生物物理进展. 2010(12)
[4]利用亮甲酚蓝染色筛选优质猪卵母细胞[J]. 田江天,王振坤,郑重,孙爽,徐萌,刘忠华. 解剖学报. 2009(02)
[5]氧分压、培养基及生长因子对猪体细胞克隆胚胎体外发育的影响[J]. 潘登科,刘吉,冯书堂,牟玉莲,张莉. 中国农业科学. 2008(04)
[6]猪体外受精胚胎、孤雌激活胚胎以及体细胞核移植胚胎的体外培养[J]. 张运海,潘登科,孙国杰,孙秀柱,李燕,戴蕴平,李宁. 中国农业科学. 2007(03)
[7]Cloned pigs derived from somatic cell nuclear transferembryos cultured in vitro atlow oxygen tension[J]. PAN Dengke1,2*, ZHANG Yunhai1*, SUN Xiuzhu1, ZHANG Jian3, LI Xuyang4, LI Yan1, GU Zhiliang1, DAI Yunping1, WU Changxin2 & LI Ning11. State Key Laboratory for Agrobiotechnology, China Agricultural University, Beijing 100094, China; 2. College of Animal Science and Technology, China Agricultural Uni- versity, Beijing 100094, China; 3. Animal Clinical Hospital, China Agricultural University, Beijing 100094, China; 4. Hebei Minghui Group of Pigs Breeding, Sanhe 065200, China. Chinese Science Bulletin. 2006(07)
博士论文
[1]卵泡抑素影响牛胚胎早期发育的研究[D]. 郭镇华.东北农业大学 2012
本文编号：3316768
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
文献综述
1. 猪胚胎体外培养的研究进展
1.1 猪胚胎体外培养的简要回顾
1.2 胚胎体外培养的应用前景
1.3 影响猪胚胎体外培养的因素
1.3.1 卵母细胞来源
1.3.2 筛选优质的卵母细胞
1.3.3 卵母细胞的体外成熟
1.3.4 胚胎培养基
1.3.5 培养添加物
1.3.6 培养气相
2. 卵泡抑素(Follistatin,FST)的研究进展
2.1 FST基因的结构定位
2.2 FST组织分布及表达
2.3 FST的生物学作用
2.3.1 FST的结合作用
2.3.2 不同FST蛋白亚型表现出不同的生物学功能
2.3.3 FST对卵泡发育和卵母细胞成熟的影响
2.3.4 FST在胚胎发育及分化过程中的作用
结语
引言
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 材料
1.1.2 主要仪器
1.1.3 主要耗材
1.1.4 所需试剂及溶液配制
1.2 试验方法
1.2.1 猪卵母细胞体外成熟
1.2.2 脱卵丘
1.2.3 猪卵母细胞孤雌激活
1.2.4 猪卵母细胞体外受精
1.2.5 传统猪体细胞核移植技术
1.2.6 间接免疫荧光染色技术
1.2.7 猪卵母细胞及胚胎的RNA提取及反转录
1.2.8 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)
1.2.9 统计分析
1.3 试验设计
2 结果
2.1 猪卵母细胞和早期胚胎中FST mRNA和蛋白的动态表达模式
2.1.1 猪卵母细胞和着床前胚胎各个发育阶段FST mRNA的表达丰度
2.1.2 猪卵母细胞和早期胚胎各个发育阶段FST蛋白的动态表达
2.2 添加不同亚型FST蛋白对猪PAEs着床前体外发育的影响
2.2.1 添加不同亚型FST蛋白对早期卵裂率和总卵裂率的影响
2.2.2 在不同阶段添加不同亚型FST对于猪PAEs囊胚形成率及囊胚质量的影响
2.3 添加不同浓度FST-315蛋白对猪PAEs、NTEs着床前体外发育的影响
2.3.1 添加不同浓度FST-315蛋白对猪PAEs着床前体外发育的影响
2.3.2 添加不同浓度FST-315蛋白对猪NTEs着床前体外发育的影响
2.4 不同时间添加FST-300蛋白对猪PAEs着床前体外发育的影响
2.5 添加不同浓度FST-300蛋白对猪NTEs着床前体外发育的影响
3 讨论
3.1 关于FST mRNA和蛋白在早期胚胎中的表达
3.2 关于不同亚型FST蛋白的作用
3.3 关于FST蛋白的添加时间
4 结论
参考文献
致谢
个人简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]亮甲酚蓝染色筛选及曲古抑菌素A对东北野猪核移植胚发育的影响[J]. 付博,刘娣,马红,何鑫淼,吴赛辉,马建章,安铁洙. 农业生物技术学报. 2012(08)
[2]Relationship Between Differential Expression of Bax and Bcl-2 Genes and Developmental Differences of Porcine Parthenotes Cultured in PZM-3 and NCSU-23[J]. CUI Mao-sheng1,2*,LIU Zhen-xing1*,WANG Xian-long1,ZHANG Jing1,WU Yi1,HAN Guo-cai1 and ZENG Shen-ming1 1 Laboratory of Animal Embryonic Biotechnology,College of Animal Science and Technology,China Agricultural University,Beijing 100193,P.R.China2 Tianjin Institute of Animal Science,Tianjin 300112,P.R.China. Agricultural Sciences in China. 2011(11)
[3]初次卵裂时间是猪克隆胚胎发育潜能的重要标识[J]. 罗学明,肖炜,冯冲,龙川,闫军,薛振华,云鹏,潘登科. 生物化学与生物物理进展. 2010(12)
[4]利用亮甲酚蓝染色筛选优质猪卵母细胞[J]. 田江天,王振坤,郑重,孙爽,徐萌,刘忠华. 解剖学报. 2009(02)
[5]氧分压、培养基及生长因子对猪体细胞克隆胚胎体外发育的影响[J]. 潘登科,刘吉,冯书堂,牟玉莲,张莉. 中国农业科学. 2008(04)
[6]猪体外受精胚胎、孤雌激活胚胎以及体细胞核移植胚胎的体外培养[J]. 张运海,潘登科,孙国杰,孙秀柱,李燕,戴蕴平,李宁. 中国农业科学. 2007(03)
[7]Cloned pigs derived from somatic cell nuclear transferembryos cultured in vitro atlow oxygen tension[J]. PAN Dengke1,2*, ZHANG Yunhai1*, SUN Xiuzhu1, ZHANG Jian3, LI Xuyang4, LI Yan1, GU Zhiliang1, DAI Yunping1, WU Changxin2 & LI Ning11. State Key Laboratory for Agrobiotechnology, China Agricultural University, Beijing 100094, China; 2. College of Animal Science and Technology, China Agricultural Uni- versity, Beijing 100094, China; 3. Animal Clinical Hospital, China Agricultural University, Beijing 100094, China; 4. Hebei Minghui Group of Pigs Breeding, Sanhe 065200, China. Chinese Science Bulletin. 2006(07)
博士论文
[1]卵泡抑素影响牛胚胎早期发育的研究[D]. 郭镇华.东北农业大学 2012
本文编号：3316768
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