CNP预处理对绵羊卵母细胞成熟、母源基因和卵丘细胞扩展相关基因表达的影响

发布时间：2021-08-02 08:09

　　本论文研究了C型钠肽（C-type natriuretic peptide,CNP）预处理对绵羊卵母细胞减数分裂阻滞和后续发育能力的影响,以及对绵羊卵母细胞成熟前后母源基因和卵丘细胞扩展相关基因表达的影响。研究结果如下:1.绵羊卵母细胞用含有200 nM CNP的TCM199分别处理0 h,2 h,4 h,6 h,或8 h,通过DAPI染色检测卵母细胞经不同时间培养后所处GV期比例。结果表明CNP可在4 h内有效的维持卵母细胞减数分裂阻滞。以体外成熟（In vitro maturation,IVM）24 h为对照组,研究CNP预处理组（200 nmol/L CNP预处理4 h然后体外成熟24 h）中卵母细胞经孤雌激活（Parthenogenetic activation,PA）后的发育情况。结果表明,CNP预处理组中孤雌胚胎囊胚率（43.44%）显著高于对照组（31.72%,P<0.05）;而两组间的卵裂率和囊胚细胞数相似。2.以IVM 24 h为对照组,200 nmol/L CNP预处理4 h然后体外成熟24 h作为CNP预处理组,通过RT-qPCR检测绵羊卵母细胞中母源基因D... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语表
1 引言
    1.1 卵母细胞成熟
        1.1.1 细胞核成熟
        1.1.2 细胞质成熟
        1.1.3 胞质成熟时细胞器的变化
        1.1.4 胞质成熟时细胞骨架的变化
    1.2 CNP对卵母细胞成熟的影响
        1.2.1 C型钠肽简介
        1.2.2 CNP对卵母细胞减数分裂阻滞的影响
        1.2.3 CNP在卵母细胞体外成熟中的应用
    1.3 母源基因Mater、Zar1和Dnmt1概述
    1.4 颗粒细胞扩展相关基因HAS2、PTX3和PTGS2概述
    1.5 研究目的及意义
    1.6 技术路线
2 CNP预处理对绵羊卵母细胞减数分裂阻滞及发育能力的影响
    2.1 材料
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 液体配制
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 耗材
    2.2 实验方法
        2.2.1 卵母细胞收集
        2.2.2 C型钠肽预处理及卵母细胞核相检测
        2.2.3 卵母细胞体外成熟、孤雌激活及体外胚胎培养
        2.2.4 囊胚细胞数鉴定
        2.2.5 统计分析
    2.3 结果
        2.3.1 CNP预处理对绵羊卵母细胞减数分裂阻滞的影响
        2.3.2 CNP预处理对绵羊孤雌胚胎发育的影响
    2.4 讨论
    2.5 结论
3 C型钠肽预处理对绵羊卵母细胞成熟前后母源基因Dnmt1,Zar1和Mater表达的影响
    3.1 材料
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 液体配制
        3.1.4 实验仪器
        3.1.5 耗材
    3.2 实验方法
        3.2.1 卵母细胞的收集
        3.2.2 C型钠肽预处理及卵母细胞体外成熟
        3.2.3 PCR引物的设计与合成
        3.2.4 卵母细胞RNA提取及实时荧光定量PCR
        3.2.5 统计分析
    3.3 结果
        3.3.1 β-actin,Dnmt1,Zar1和Mater标准曲线状况
        3.3.2 Dnmt1,Zar1,Mater和β-actin扩增曲线分析
        3.3.3 Dnmt1,Zar1,Mater和β-actin溶解曲线分析
        3.3.4 实时荧光定量PCR产物特异性检测
        3.3.5 卵母细胞成熟过程中CNP预处理对Dnmt1表达的影响
        3.3.6 卵母细胞成熟过程中CNP预处理对Zar1表达的影响
        3.3.7 卵母细胞成熟过程中CNP预处理对Mater表达的影响
    3.4 讨论
    3.5 结论
4 CNP预处理对绵羊卵母细胞成熟前后卵丘细胞扩展相关基因PTGS2、HAS2和PTX3表达的影响
    4.1 材料
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 液体配制
        4.1.4 实验仪器
        4.1.5 耗材
    4.2 实验方法
        4.2.1 卵母细胞的收集
        4.2.2 C型钠肽预处理及卵母细胞体外成熟
        4.2.3 PCR引物的设计与合成
        4.2.4 卵母细胞RNA提取及实时荧光定量PCR
        4.2.5 统计分析
    4.3 结果
        4.3.1 β-actin、PTGS2、HAS2和PTX3标准曲线状况
        4.3.2 β-actin、PTGS2、HAS2和PTX3扩增曲线分析
        4.3.3 β-actin、PTGS2、HAS2和PTX3溶解曲线分析
        4.3.4 实时荧光定量PCR产物特异性检测
        4.3.5 卵母细胞成熟过程中CNP预处理对PTGS2表达的影响
        4.3.6 卵母细胞成熟过程中CNP预处理对HAS2表达的影响
        4.3.7 卵母细胞成熟过程中CNP预处理对PTX3表达的影响
    4.4 讨论
    4.5 结论
5 总结
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：3317213