重组猪源OAS1抗日本脑炎病毒的特性研究

发布时间：2021-08-02 23:50

　　2’-5’寡腺苷合成酶（2’-5’oligoadenylate synthetases,OAS）是哺乳动物先天性免疫系统的重要成分,OAS蛋白传统上认为是细胞内的抗病毒蛋白。它的本质是一种干扰素诱导的抗病毒蛋白。细胞内的OAS/RNaseL信号通路在宿主控制黄病毒、呼肠孤病毒和脑心肌炎病毒的先天性免疫反应中起重要作用。此外,近年来已有研究证实OAS存在不依赖于RNaseL途径的抗病毒作用。OAS蛋白能直接抑制病毒增殖而不需要已知的抗病毒信号通道的激活。小鼠、马和人中均发现OAS基因是抗黄病毒感染的生物标志基因,猪源与人源OAS1蛋白的氨基酸同源性为73%,具有相似的酶学特征,因此进一步研究猪是否也存在抗黄病毒（JEV）感染的生物标记基因以及OAS基因是否就是猪感染JEV致病的风险标志基因是必要的。鉴于日本乙型脑炎在中国的严重危害及其传播范围广泛；JEV疾病给养猪业带来了严重的经济损失,以及猪作为中间宿主在JEV传播过程中的重要作用,研究猪OAS在抗JEV感染中的作用及其分子机理具有重要的意义。本研究设计方案主要包括以下几个内容：1.重组OAS1蛋白的可溶性表达与纯化根据已发表的猪源OA... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：125 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述
    第一章 OAS抗病毒功能研究进展
        1 OAS家族的基因组成
            1.1 人类的OAS基因组成
            1.2 猪的OAS基因组成
            1.3 小鼠的OAS基因组成
        2 OAS蛋白的结构
        3 OAS的生物学功能以及催化作用机制研究
            3.1 OAS的生物学功能：OAS独特的2’聚合酶活性以及OAS蛋白的来源
            3.2 OAS的催化作用机制
        4 OAS蛋白家族抗病毒的分子机制研究进展
            4.1 OAS蛋白家族成员依赖于RNaseL途径的抗病毒作用
            4.2 OAS蛋白家族成员非依赖于RNaseL途径的抗病毒作用
        5 OAS蛋白与临床疾病的关系
        6 有关OAS蛋白研究的前景展望
    第二章 日本乙型脑炎的研究背景
        1 日本乙型脑炎病毒的病原学特征及其理化特性
        2 日本乙型脑炎的流行以及流行的模式
        3 日本乙型脑炎病毒的扩散
        4 日本乙型脑炎的毒力影响因素和致病机理
            4.1 毒力影响因素
            4.2 致病机理
        5 流行性乙型脑炎病毒的生物合成
        6 流行性乙型脑炎疫苗的相关研究
        7 流行性乙型脑炎的诊断技术概况
        8 流行性乙型脑炎综合防治管理的有效措施
            8.1 积极宣传
            8.2 加强饲养管理措施
            8.3 加强预防措施
            8.4 免疫接种防治结合
            8.5 对症治疗措施
            8.6 加强监测
        9 流行性乙型脑炎疫苗的前景展望
        参考文献
第二篇 实验部分
    第三章 重组OAS1的可溶性表达与理化特性研究
        摘要
        1 实验材料
            1.1 材料
            1.2 实验动物
            1.3 主要试剂与工具酶
            1.4 主要仪器设备
        2 实验方法
            2.1 猪源OAS1基因的引物设计与合成
            2.2 提取PK-15细胞的总RNA
            2.3 猪源OAS1目的基因的RT-PCR扩增
            2.4 猪源OAS1目的基因原核表达载体的构建：连接及转化
            2.5 重组OAS1蛋白的可溶性诱导表达纯化
            2.6 重组OAS1蛋白的Western blot分析鉴定
            2.7 制备重组OAS1蛋白多克隆抗体并利用Western blot方法鉴定其反应原性
        3 实验结果
            3.1 猪源OAS1基因克隆与序列分析
            3.2 猪源OAS1原核表达重组质粒的构建
            3.3 猪源OAS1蛋白在大肠杆菌Rosetta2中的表达与纯化
            3.4 猪源OAS1蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体
        4 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第四章 重组OAS1蛋白抗病毒特性研究
        摘要
        1 实验材料
            1.1 细胞和毒株
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
        2 实验方法
            2.1 重组OAS1蛋白的脱盐处理,浓度测定以及其对细胞毒性的检测
            2.2 重组OAS1蛋白抗病毒谱的测定
            2.3 重组OAS1蛋白抑制病毒感染细胞的最佳时机分析
        3 实验结果
            3.1 重组OAS1蛋白的脱盐处理,浓度测定以及其对细胞毒性的检测
            3.2 重组OAS1蛋白抗病毒谱的测定
            3.3 重组OAS1蛋白抑制病毒感染细胞的最佳时机分析
        4 讨论
        参考文献
        Abstract
    第五章 重组OAS1抗日本脑炎病毒的作用机制研究
        摘要
        1 实验材料
            1.1 细胞和毒株
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
        2 实验方法
            2.1 重组OAS1蛋白对JEV吸附和入胞的影响
            2.2 重组OAS1蛋白对JEV在细胞中早期增殖的影响
            2.3 重组OAS1蛋白在BHK-21细胞系上对JEV子代病毒感染效率的影响
            2.4 重组OAS1aD74A/D76A原核表达,纯化以及在BHK-21细胞系上抗JEV的活性测定
        3 实验结果
            3.1 重组OAS1蛋白对JEV吸附和入胞的影响
            3.2 重组OAS1蛋白对JEV在细胞中早期增殖的影响
            3.3 重组OAS1蛋白在BHK-21细胞系上对JEV子代病毒感染效率的影响
            3.4 重组OAS1aD74A/D76A原核表达,纯化以及在BHK-21细胞系上抗JEV的活性测定
        4 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
全文总结
致谢



本文编号：3318510