双峰驼IgA特异性抗原表位筛选与抗体制备

发布时间：2021-08-04 06:38

　　黏膜免疫在维持机体局部免疫稳态中发挥关键作用,其中免疫球蛋白A（Immunoglobulin A,IgA）是黏膜免疫应答的主效应分子。本文拟通过分子生物学、免疫组织化学、统计学等方法制备高效特异的抗双峰驼IgA抗体,旨在为深入探讨双峰驼IgA在机体中的相关免疫学功能提供依据与材料支持,进而为揭示双峰驼黏膜免疫机制奠定基础。本文首先对双峰驼IgA的生物信息进行了分析。通过DNAMAN、BepiPred 2.0等软件对双峰驼IgA重链恒定区（IgA-H）进行一级结构的差异性分析、B细胞抗原表位预测,结合筛选出一段具有代表性的基因序列（F-IgA-H）,并使用ProtParam对IgA-H和F-IgA-H的理化性质进行分析。之后分别构建了二者的原核表达质粒pET-28a-IgA-H和pET-28a-F-IgA-H,诱导其在BL21中表达,并优化培养条件,SDS-PAGE和Western Blot验证其表达结果。之后再用纯化的重组蛋白分别制备兔抗双峰驼IgA-H多克隆抗体（PAb-H）与兔抗双峰驼F-IgA-H多克隆抗体（PAb-F）,ELISA和Western Blot检测抗体效价和特异性。... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

细胞抗原分析结果

图 2 IgA-H、F-IgA-H 一级结构对比结果Fig.2 The comparison results of primary structure of IgA-H and F-IgA-H3 讨论在经过软件对比筛选后的 F-IgA-H 相似性明显低于 IgA-H，与 IgM-H 的相似性从 34.74%降低为 16.03%，与 IgE-H 的相似性从 33.56%降低为 14.56%；相较结构和功能最为相似的 IgG 而言，筛选后的 F-IgA-H 与 IgG-H 的相似性从 43.0%降低为 21.04%，有助于后续实验的开展。生物信息学的作为整个生物医学领域发展的重要组成部分及研究前沿，其主体和灵魂是生物学，带着生物学问题出发，以各种手段和技术来解决生物学问题才是生物信息学的本质[97, 98]。生物信息学技术自诞生后，通过构建多种共享数据平台，革新检测技术，使这门学科得以飞速发展。将海量的生物学数据转化为可供参考的信息，是生物信息学的发展必然结果，结合数据挖掘，从中寻找规律，

甘肃农业大学 2019 届硕士学位论文浓缩：透析后的蛋白溶液，用紫外分光光度计测得蛋白含量较低，进一步浓缩。浓缩时将透析袋埋入蔗糖，至所需体积时取出，用紫外分光光度计测得蛋白浓度为 2.9 mg/mL，每管 500 L 分装，-80℃保存。2 结果2.1 双酶切结果重组质粒 pET-28a-IgA-H 经双酶切鉴定分析后，得到大小约为 1000 bp 的目的片段 IgA-H，结果如图 1A 所示。重组质粒 pET-28a-F-IgA-H 经双酶切后，得到 500 bp 左右的 F-IgA-H，大小与预期相符，如图 1B。两者皆测序正确，都可进行诱导表达。


本文编号：3321207