家兔永生化黑色素细胞的建立、鉴定及应用
发布时间：2021-08-06 05:56
哺乳动物毛色主要取决于黑色素沉积,而黑色素生成主要受黑色素细胞调控,黑色素细胞产生不同种类的黑色素,以及这些色素的不同分布致使哺乳动物形成多种毛色类型。在现代毛兔和皮兔产业中,白色被毛在制成服装等制品前需染色,给环境和消费者健康造成影响,而纯天然的彩色被毛不会存在此问题,也更受消费者青睐。要解决这个问题,势必要深入解析家兔被毛色素沉积机理,为毛色改造和新型毛色品种培育提供理论依据。然而目前,兔的永生化黑色素细胞系至今尚未建立,导致兔的毛色形成机制和黑色素沉积机理研究滞后。本研究围绕家兔黑色素细胞永生化细胞系的建立及鉴定,为主要内容开展研究,并以此为素材,初步分析色素沉积关键基因——小眼畸形相关转录因子（microphthalmia-associated transcription factor gene,MITF）的表达模式和功能。所建立的永生化黑色素细胞系为研究兔皮毛黑色素沉积规律提供一个理想的体外细胞模型,同时为进一步揭示皮毛动物的色素沉积的分子机制奠定了基础。本实验结果如下:1、根据课题组前期建立家兔黑色素细胞体外培养体系,利用两步酶消化法分离家兔原代皮肤黑色素细胞,并以此为基础...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－２?ＬＶ－ＳＶ４０ＬＴ慢病毒鉴定结果图??
经０．１％Ｌ－Ｄ〇ｐａ染色后，发现原代黑色素细胞、第１９代黑色素细胞及第５６代黑色??素细胞，倒置显微镜下观察到细胞的胞浆和树突均呈现棕褐色，染色结果均为阳性（如??图２－６），且细胞形态均呈现多极状，未发生明显变化。??
２３＿??可获得较纯的黑色素细胞，呈多极状，两极或三极，折光性强（图２－３）。??图２－３原代黑色素细胞形态（１０〇ｘ）??注：Ａ；分离的第５ｄ黑色素细胞；Ｂ：分离的第９?ｄ黑色素细胞；Ｂ：分离的第ｌｉｄ黑色素细胞；??２．４?ＬＶ－ＳＶ４０ＬＴ慢病毒感染复数的确定??将病毒液按照ＭＯＩ为５０和１００的比例稀释感染家兔黑色素细胞，以ｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ－??Ｐｕｒｏ－ＧＦＰ感染组作为对照。ＭＯＩ为１００的感染效率最高（如图２－４），因此选择感染复数??为１００的病毒稀释比例感染黑色素细胞。??图?２－４ｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ－Ｐｕｒｏ－ＧＦＰ?感染?４８ｈ?荧光图（１００ｘ）??注：Ａ：?ＭＯＩ＝１００；?Ｂ：ＭＯＩ＝５０??２．５家兔黑色素细胞的感染及单克隆细胞株的获得??按ＭＯＩ为１００的稀释比例感染黑色素细胞，４８ｈ后换成含有１％ＨＭＧＳ的Ｍ２５４培养??基，添加２?ｐｇ／ｍＬ的ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ持续培养１周，之后换成含有１?ｐｇ／ｍＬ的ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ培养??２周。正常培养的原代黑色素细胞全部死亡，病毒感染组的细胞剩零星几个细胞。初步观??察，剩余筛选后阳性表达的细胞仍能保持家兔黑色素细胞的形态特征，将这些细胞消化下??来后接种到９６孔板中待长满后扩大培养。得到４株阳性黑色素细胞系，但只有１株传到??５０代（如图２－５）。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]1例种痘样水疱样EB病毒感染相关淋巴细胞增生性疾病病理分析[J]. 王娜. 医学理论与实践. 2019(08)
[2]EB病毒衣壳抗原IgM抗体、衣壳抗原IgA抗体、衣壳抗原IgG抗体、EBV-DNA检测在鼻咽癌早期诊断中的临床应用[J]. 吴博文,邹光美,黄朝任,陈武. 当代医学. 2019(11)
[3]胸主动脉瘤发生发展过程中端粒长度及端粒酶活性改变的影响因素研究进展[J]. 徐泓杰,王国坤,刘洋,徐志云. 山东医药. 2019(06)
[4]人脐静脉内皮细胞永生化的研究进展[J]. 李盛波,郑勇斌. 医学综述. 2018(22)
[5]端粒(酶)对衰老及肿瘤的调节研究进展[J]. 唐珍,王含彦,郭冬梅. 中国现代医学杂志. 2018(30)
[6]端粒和端粒酶结构与作用的研究进展[J]. 张涵渝. 信息记录材料. 2018(08)
[7]端粒及端粒酶与皮肤光老化关系的研究进展[J]. 谭玲,李大铁. 贵州医药. 2018(05)
[8]腺病毒与慢病毒感染猪原代细胞的比较研究[J]. 姚永曦,吴睿帆,汪以真,王新霞. 中国畜牧杂志. 2018(04)
[9]黑色素细胞中MITF相关信号通路调控因子的研究进展[J]. 刘文艳,李园,蔡永强,张利环,李慧锋,李宏,朱芷葳. 畜牧与兽医. 2017(08)
[10]脂质体介导SV40T基因构建东方田鼠成纤维细胞永生系技术体系的建立[J]. 成钢,汤志宏,董文君,李淑红,王京仁. 黑龙江畜牧兽医. 2017(03)
博士论文
[1]AREG/EGFR信号轴介导胰腺癌EMT效应及相关机制的研究与人胰腺星形细胞永生化建系[D]. 汪莉.北京协和医学院 2016
[2]猿肾病毒大T抗原介导的永生化人前软骨干细胞株构建的实验研究[D]. 王俊芳.华中科技大学 2009
硕士论文
[1]Slc7a11在獭兔皮毛黑色素沉积中的作用机制研究[D]. 穆琳.扬州大学 2018
[2]毛囊源性黑色素细胞的分离、培养、鉴定[D]. 樊蕊蕊.吉林大学 2016
[3]狨猴肝细胞系的建立和功能研究[D]. 郭正隆.天津医科大学 2016
[4]小鼠黑色素细胞体外分离培养及生物学特性研究[D]. 石占全.山西农业大学 2015
[5]SV40T介导的SD大鼠胰岛细胞永生化的实验研究[D]. 韩猛.华中科技大学 2010
[6]SV40T抗原基因诱导可逆性永生化黑素细胞的生物学特征评价[D]. 常海.第三军医大学 2008
本文编号：3325205
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－２?ＬＶ－ＳＶ４０ＬＴ慢病毒鉴定结果图??
经０．１％Ｌ－Ｄ〇ｐａ染色后，发现原代黑色素细胞、第１９代黑色素细胞及第５６代黑色??素细胞，倒置显微镜下观察到细胞的胞浆和树突均呈现棕褐色，染色结果均为阳性（如??图２－６），且细胞形态均呈现多极状，未发生明显变化。??
２３＿??可获得较纯的黑色素细胞，呈多极状，两极或三极，折光性强（图２－３）。??图２－３原代黑色素细胞形态（１０〇ｘ）??注：Ａ；分离的第５ｄ黑色素细胞；Ｂ：分离的第９?ｄ黑色素细胞；Ｂ：分离的第ｌｉｄ黑色素细胞；??２．４?ＬＶ－ＳＶ４０ＬＴ慢病毒感染复数的确定??将病毒液按照ＭＯＩ为５０和１００的比例稀释感染家兔黑色素细胞，以ｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ－??Ｐｕｒｏ－ＧＦＰ感染组作为对照。ＭＯＩ为１００的感染效率最高（如图２－４），因此选择感染复数??为１００的病毒稀释比例感染黑色素细胞。??图?２－４ｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ－Ｐｕｒｏ－ＧＦＰ?感染?４８ｈ?荧光图（１００ｘ）??注：Ａ：?ＭＯＩ＝１００；?Ｂ：ＭＯＩ＝５０??２．５家兔黑色素细胞的感染及单克隆细胞株的获得??按ＭＯＩ为１００的稀释比例感染黑色素细胞，４８ｈ后换成含有１％ＨＭＧＳ的Ｍ２５４培养??基，添加２?ｐｇ／ｍＬ的ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ持续培养１周，之后换成含有１?ｐｇ／ｍＬ的ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ培养??２周。正常培养的原代黑色素细胞全部死亡，病毒感染组的细胞剩零星几个细胞。初步观??察，剩余筛选后阳性表达的细胞仍能保持家兔黑色素细胞的形态特征，将这些细胞消化下??来后接种到９６孔板中待长满后扩大培养。得到４株阳性黑色素细胞系，但只有１株传到??５０代（如图２－５）。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]1例种痘样水疱样EB病毒感染相关淋巴细胞增生性疾病病理分析[J]. 王娜. 医学理论与实践. 2019(08)
[2]EB病毒衣壳抗原IgM抗体、衣壳抗原IgA抗体、衣壳抗原IgG抗体、EBV-DNA检测在鼻咽癌早期诊断中的临床应用[J]. 吴博文,邹光美,黄朝任,陈武. 当代医学. 2019(11)
[3]胸主动脉瘤发生发展过程中端粒长度及端粒酶活性改变的影响因素研究进展[J]. 徐泓杰,王国坤,刘洋,徐志云. 山东医药. 2019(06)
[4]人脐静脉内皮细胞永生化的研究进展[J]. 李盛波,郑勇斌. 医学综述. 2018(22)
[5]端粒(酶)对衰老及肿瘤的调节研究进展[J]. 唐珍,王含彦,郭冬梅. 中国现代医学杂志. 2018(30)
[6]端粒和端粒酶结构与作用的研究进展[J]. 张涵渝. 信息记录材料. 2018(08)
[7]端粒及端粒酶与皮肤光老化关系的研究进展[J]. 谭玲,李大铁. 贵州医药. 2018(05)
[8]腺病毒与慢病毒感染猪原代细胞的比较研究[J]. 姚永曦,吴睿帆,汪以真,王新霞. 中国畜牧杂志. 2018(04)
[9]黑色素细胞中MITF相关信号通路调控因子的研究进展[J]. 刘文艳,李园,蔡永强,张利环,李慧锋,李宏,朱芷葳. 畜牧与兽医. 2017(08)
[10]脂质体介导SV40T基因构建东方田鼠成纤维细胞永生系技术体系的建立[J]. 成钢,汤志宏,董文君,李淑红,王京仁. 黑龙江畜牧兽医. 2017(03)
博士论文
[1]AREG/EGFR信号轴介导胰腺癌EMT效应及相关机制的研究与人胰腺星形细胞永生化建系[D]. 汪莉.北京协和医学院 2016
[2]猿肾病毒大T抗原介导的永生化人前软骨干细胞株构建的实验研究[D]. 王俊芳.华中科技大学 2009
硕士论文
[1]Slc7a11在獭兔皮毛黑色素沉积中的作用机制研究[D]. 穆琳.扬州大学 2018
[2]毛囊源性黑色素细胞的分离、培养、鉴定[D]. 樊蕊蕊.吉林大学 2016
[3]狨猴肝细胞系的建立和功能研究[D]. 郭正隆.天津医科大学 2016
[4]小鼠黑色素细胞体外分离培养及生物学特性研究[D]. 石占全.山西农业大学 2015
[5]SV40T介导的SD大鼠胰岛细胞永生化的实验研究[D]. 韩猛.华中科技大学 2010
[6]SV40T抗原基因诱导可逆性永生化黑素细胞的生物学特征评价[D]. 常海.第三军医大学 2008
本文编号：3325205
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