鸡白痢沙门菌脂多糖合成基因的鉴定及其突变株免疫生物学特性的初步分析
发布时间：2021-08-08 02:00
鸡白痢沙门菌是宿主（禽）适应性病原菌,既能水平传播又能垂直传播,易导致雏鸡的高致病性和高死亡率,易对禽养殖业造成严重的经济损失,因此鸡白痢在我国种禽场是优先防控和重点防治的主要疾病之一。但是,当前鸡白痢沙门菌检疫淘汰的防控措施在我国未能达到预期效果,希冀研发新型疫苗和药物等措施,以尽早实现我国种禽场鸡白痢沙门菌净化。脂多糖是沙门菌的重要致病因子,其合成基因是研发新型疫苗和药物的靶基因。脂多糖由类脂A、核心多糖和O抗原构成,其中O抗原的结构变异是光滑型和粗糙型转换的基础,但在鸡白痢沙门菌致病机制中研究较少。因此,为寻找脂多糖生物合成基因,本研究应用信号标签突变技术建立鸡白痢沙门菌转座突变库,通过玻板凝集试验筛选与O9单抗不发生玻板凝集的粗糙型突变株,并对其免疫生物学特性进行初步分析,进一步了解脂多糖合成基因对鸡白痢沙门菌致病性的效应。1.粗糙型鸡白痢沙门菌的筛选及其功能基因鉴定应用转座突变技术构建鸡白痢沙门菌S06004转座突变库,利用O9单克隆抗体与粗糙型沙门菌不发生玻板凝集的现象进行高通量筛选,并通过吖啶橙方法予以验证。从10,022株突变株中筛选得到4株粗糙型突变株,PCR扩增转座...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１沙门菌感染不同的细胞和器官（Ｌａｈｉｒｉｅｔａｌ．，２０１０）??Ｆｉｇ．?１?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｅｌｌｓ?ａｎｄ?ｏｒｇａｎｓ?（Ｌａｈｉｒｉ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１０）??
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ｙｉｘｏ＿ｐ＾??＾４ｉｌｌ?Ｉ?Ｌ．??、?ＰａｇＬ?｛??｛??ＰａｇＰ??Ｊ??图３鼠伤寒沙门菌ＬＰＳ的结构（ＥｍｓｔＲ．Ｋ．ｅｔａｌ．，２００】）??Ｆｉｇ．?３?Ｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｉＳａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｗｎ?ＬＰＳ?（Ｅｒｎｓｔ?Ｒ．Ｋ．?ｅｔ?ａｌ．，?２００１）??Ｗｚｖ＊ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ＡＢＣ＾ｅｐｅｎｄｅｎｉ??ｆ?ｆ?ｆ?？?ｆ??環曾’ｉ?響＂；??ｉ?！仇?ｉ?Ｉ?Ｐ３？ｉ?ｉ?ｉ??？?〇?〇??图４?Ｏ抗原不同的合成途径??（ＧＴ：糖基转移酶，［Ｏ］表示Ｏ抗原的重复单位，Ｓ：单个糖单位（ＢｅｒｔａｎｉａｎｄＲｕｉｚ，２０１８））??Ｆｉｇ．?４?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｐａｔｈｗａｙｓ?ｏｆ?Ｏ－ａｎｔｉｇｅｎ??（ＧＴ：?ｆｏｒ?ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，?［０］：?ａ?ｒｅｐｅａｔｉｎｇ?ｕｎｉｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?０?ａｎｔｉｇｅｎ，?Ｓ：?ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ?ｓｕｇａｒ?ｕｎｉｔｓ?（Ｂｅｒｔａｎｉ??ａｎｄ?Ｒｕｉｚ，?２０１８））??４．２脂多糖的基因合成??参与ＬＰＳ生物合成的相关基因主要集中在细菌基因组上的３个区段内，最初命名??为ｒ／ａ基因簇、ｒ／Ｚ＞基因簇以及ｒ／Ｃ区段（焦扬，２０１８）。９个基因参与类脂Ａ合成，１３??个基因与核心多糖合成相关的，２８个基因涉及Ｏ－抗原组装和聚合（郭荣显，２０１９）。??吩基因簇（ｗａｆｌ区）主要编码核心多糖（图５），大肠杆菌Ｋ－１２代表了第一个完??整测序的ｗｍ区，在很大程度上依赖于沙门菌突变株的ＬＰＳ结构和ＬＰＳ特异性噬菌体??６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]广东省茂名市儿童食源性沙门菌感染的血清型分型和耐药特征[J]. 彭淑萍,李波,廖国东,许铭清,黄水飞. 中国热带医学. 2020(07)
[2]羊种布鲁氏菌wzt基因的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 赵鹭,葛志毅,刘永生,李学瑞,曹小安. 中国畜牧兽医. 2019(12)
[3]2015～2018年华东地区野禽沙门菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 李玉军,仲艳,费中杰,冯政,张伟伟,李超,李刚,秦涛,陈素娟,彭大新. 中国家禽. 2019(09)
[4]黄羽肉种鸡场死胚中鸡白痢沙门菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 晏玲,向勇,刘鹏,黎丽珍,廖明,曹伟胜. 中国家禽. 2019(08)
[5]SKLZΔspiC鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株的遗传稳定性分析[J]. 王耀楠,王虎强,蔡媛,张健,潘志明,焦新安,耿士忠. 中国生物制品学杂志. 2019(02)
[6]鸡白痢病的发生与综合防治技术[J]. 莫方荣. 畜禽业. 2018(09)
[7]南京市规模蛋鸡场鸡白痢血清流行病学调查[J]. 李凤玲,吕宗德. 畜牧与兽医. 2015(11)
[8]鸡肠炎沙门氏菌转座突变体库的构建及减毒菌株的筛选[J]. 吕爽,朱婷,王秀梅,刘慧芳,司微,于申业,陈利苹,刘思国. 中国预防兽医学报. 2013(03)
[9]Tn5及其应用研究进展[J]. 徐广宇,魏成国,马金姝,张晓天,王放. 中国实验诊断学. 2012(06)
[10]转座子随机插入鉴定肠炎沙门氏菌生物膜形成相关基因[J]. 董洪燕,张小荣,潘志明,彭大新,刘秀梵. 微生物学报. 2008(07)
博士论文
[1]鸡白痢沙门菌致病多样性及DIVA疫苗候选株的构建与免疫作用[D]. 郭荣显.扬州大学 2019
[2]沙门氏菌C1血清组特异基因功能分析[D]. 周秀娟.上海交通大学 2015
硕士论文
[1]鸡白痢沙门菌疫苗株S06004ΔspiC种子库构建及其安全性和免疫保护效力评估[D]. 黄翠颖.扬州大学 2019
[2]沙门菌O9抗原单克隆抗体竞争ELISA试剂盒的研制及初步应用[D]. 耿浩鹏.扬州大学 2018
[3]鸡白痢沙门菌LPS合成和生物被膜形成相关基因缺失株的构建及免疫效力评价[D]. 满成连.扬州大学 2018
[4]粗糙型猪霍乱沙门菌与鼠伤寒沙门菌rfaJ基因缺失株的构建及其生物学特性研究[D]. 朱姗姗.扬州大学 2017
[5]鸡白痢沙门菌△fur△speDE的构建及其免疫生物学特性初步研究[D]. 安树敏.扬州大学 2016
[6]鸡白痢沙门菌LPS合成相关基因缺失株的构建及免疫效力评价[D]. 吴白.扬州大学 2016
[7]禽致病性大肠杆菌脂多糖突变株的构建及其生物学特性研究[D]. 韩月.中国农业科学院 2014
[8]鸡白痢沙门菌鸡胚感染模型的建立及其减毒突变株的筛选与鉴定[D]. 田青.扬州大学 2014
[9]鸡白痢沙门菌S06004ΔspiC突变株的构建及其免疫生物学特性初步研究[D]. 刘男男.扬州大学 2012
本文编号：3328984
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１沙门菌感染不同的细胞和器官（Ｌａｈｉｒｉｅｔａｌ．，２０１０）??Ｆｉｇ．?１?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｅｌｌｓ?ａｎｄ?ｏｒｇａｎｓ?（Ｌａｈｉｒｉ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１０）??
ＪＬ－１８??／?…．．?．．．Ｔ．．．．．．＿?ｒｅｔｅａｓｅ??Ｉ?ｒＴｊ?（ＮＦ－ｋＢ：?（ＡＰ－１Ｊ??；丫一ｒ??？ｆＦ２ａ?Ａｎｔｉ－ａｐｏｐｔＯｌｉｃ?Ｐｒ〇－ｉｎｆｉ＊ｍｍａｔ〇ｒｙ??ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ?ｆａｃｔｏｒｓ?ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ??？?八?？??Ｐｒｏ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?／?Ｖ?Ｐｒｏ－ａｐｏｐＣｏｔｉｃ??ｅｆｆｅｃｔ?＼、、、?ｅｆｆｅｃｔ??？?＞?ｒ??Ｃａｓｐａｓｅ?３??ｔ??Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ??图２革兰阴性菌致巨噬细胞死亡的途径（ＧｕｉｎｅｙＤ．Ｇ．，２００５）??Ｆｉｇ．?２?Ｐａｔｈｗａｙｓ?ｏｆ?ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ?ｂｙ?Ｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅ?（Ｇｕｉｎｅｙ?Ｄ．Ｇ．，?２００５）??４脂多糖的研究进展??脂多糖（图３）是沙门菌细胞壁外膜的重要组成部分，主要由类脂Ａ、核心多糖和??０抗原构成，在菌株的致病性中起着重要作用（Ｈｉｃｋｓ?ａｎｄ?Ｊｉａ，?２０１８）。??４．１脂多糖的结构??４．１．１类脂Ａ??类脂Ａ是脂多糖的保守脂质成分，将ＬＰＳ固定在外膜上，由两个葡糖胺连接多个??脂肪酸。目前，大肠杆菌的脂多糖合成己被研究清楚，其合成途径、转运途径与大多??数革兰阴性菌相似。脂质Ａ的生物合成是由九种酶（ＬｐｘＡ、ＬｐｘＣ、ＬｐｘＤ、ＬｐｘＨ、ＬｐｘＢ、??ＬｐｘＫ、ＫｄｔＡ、ＬｐｘＬ、ＬｐｘＭ）催化的，需要三种不同的蛋白结合的酰基供体底物以及??ＵＤＰ－乙酰葡萄糖胺（ＵＤＰ－ＧｌｃＮＡｃ）、ＡＴＰ?和?ＣＭＰ－Ｋｄｏ?（ＸｉａｏＸ．?ｅｔａｌ．，２０１７）。首先??通过ＬｐｘＡ、ＬｐｘＣ、Ｌｐｘ
ｙｉｘｏ＿ｐ＾??＾４ｉｌｌ?Ｉ?Ｌ．??、?ＰａｇＬ?｛??｛??ＰａｇＰ??Ｊ??图３鼠伤寒沙门菌ＬＰＳ的结构（ＥｍｓｔＲ．Ｋ．ｅｔａｌ．，２００】）??Ｆｉｇ．?３?Ｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｉＳａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｗｎ?ＬＰＳ?（Ｅｒｎｓｔ?Ｒ．Ｋ．?ｅｔ?ａｌ．，?２００１）??Ｗｚｖ＊ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ＡＢＣ＾ｅｐｅｎｄｅｎｉ??ｆ?ｆ?ｆ?？?ｆ??環曾’ｉ?響＂；??ｉ?！仇?ｉ?Ｉ?Ｐ３？ｉ?ｉ?ｉ??？?〇?〇??图４?Ｏ抗原不同的合成途径??（ＧＴ：糖基转移酶，［Ｏ］表示Ｏ抗原的重复单位，Ｓ：单个糖单位（ＢｅｒｔａｎｉａｎｄＲｕｉｚ，２０１８））??Ｆｉｇ．?４?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｐａｔｈｗａｙｓ?ｏｆ?Ｏ－ａｎｔｉｇｅｎ??（ＧＴ：?ｆｏｒ?ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，?［０］：?ａ?ｒｅｐｅａｔｉｎｇ?ｕｎｉｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?０?ａｎｔｉｇｅｎ，?Ｓ：?ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ?ｓｕｇａｒ?ｕｎｉｔｓ?（Ｂｅｒｔａｎｉ??ａｎｄ?Ｒｕｉｚ，?２０１８））??４．２脂多糖的基因合成??参与ＬＰＳ生物合成的相关基因主要集中在细菌基因组上的３个区段内，最初命名??为ｒ／ａ基因簇、ｒ／Ｚ＞基因簇以及ｒ／Ｃ区段（焦扬，２０１８）。９个基因参与类脂Ａ合成，１３??个基因与核心多糖合成相关的，２８个基因涉及Ｏ－抗原组装和聚合（郭荣显，２０１９）。??吩基因簇（ｗａｆｌ区）主要编码核心多糖（图５），大肠杆菌Ｋ－１２代表了第一个完??整测序的ｗｍ区，在很大程度上依赖于沙门菌突变株的ＬＰＳ结构和ＬＰＳ特异性噬菌体??６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]广东省茂名市儿童食源性沙门菌感染的血清型分型和耐药特征[J]. 彭淑萍,李波,廖国东,许铭清,黄水飞. 中国热带医学. 2020(07)
[2]羊种布鲁氏菌wzt基因的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 赵鹭,葛志毅,刘永生,李学瑞,曹小安. 中国畜牧兽医. 2019(12)
[3]2015～2018年华东地区野禽沙门菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 李玉军,仲艳,费中杰,冯政,张伟伟,李超,李刚,秦涛,陈素娟,彭大新. 中国家禽. 2019(09)
[4]黄羽肉种鸡场死胚中鸡白痢沙门菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 晏玲,向勇,刘鹏,黎丽珍,廖明,曹伟胜. 中国家禽. 2019(08)
[5]SKLZΔspiC鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株的遗传稳定性分析[J]. 王耀楠,王虎强,蔡媛,张健,潘志明,焦新安,耿士忠. 中国生物制品学杂志. 2019(02)
[6]鸡白痢病的发生与综合防治技术[J]. 莫方荣. 畜禽业. 2018(09)
[7]南京市规模蛋鸡场鸡白痢血清流行病学调查[J]. 李凤玲,吕宗德. 畜牧与兽医. 2015(11)
[8]鸡肠炎沙门氏菌转座突变体库的构建及减毒菌株的筛选[J]. 吕爽,朱婷,王秀梅,刘慧芳,司微,于申业,陈利苹,刘思国. 中国预防兽医学报. 2013(03)
[9]Tn5及其应用研究进展[J]. 徐广宇,魏成国,马金姝,张晓天,王放. 中国实验诊断学. 2012(06)
[10]转座子随机插入鉴定肠炎沙门氏菌生物膜形成相关基因[J]. 董洪燕,张小荣,潘志明,彭大新,刘秀梵. 微生物学报. 2008(07)
博士论文
[1]鸡白痢沙门菌致病多样性及DIVA疫苗候选株的构建与免疫作用[D]. 郭荣显.扬州大学 2019
[2]沙门氏菌C1血清组特异基因功能分析[D]. 周秀娟.上海交通大学 2015
硕士论文
[1]鸡白痢沙门菌疫苗株S06004ΔspiC种子库构建及其安全性和免疫保护效力评估[D]. 黄翠颖.扬州大学 2019
[2]沙门菌O9抗原单克隆抗体竞争ELISA试剂盒的研制及初步应用[D]. 耿浩鹏.扬州大学 2018
[3]鸡白痢沙门菌LPS合成和生物被膜形成相关基因缺失株的构建及免疫效力评价[D]. 满成连.扬州大学 2018
[4]粗糙型猪霍乱沙门菌与鼠伤寒沙门菌rfaJ基因缺失株的构建及其生物学特性研究[D]. 朱姗姗.扬州大学 2017
[5]鸡白痢沙门菌△fur△speDE的构建及其免疫生物学特性初步研究[D]. 安树敏.扬州大学 2016
[6]鸡白痢沙门菌LPS合成相关基因缺失株的构建及免疫效力评价[D]. 吴白.扬州大学 2016
[7]禽致病性大肠杆菌脂多糖突变株的构建及其生物学特性研究[D]. 韩月.中国农业科学院 2014
[8]鸡白痢沙门菌鸡胚感染模型的建立及其减毒突变株的筛选与鉴定[D]. 田青.扬州大学 2014
[9]鸡白痢沙门菌S06004ΔspiC突变株的构建及其免疫生物学特性初步研究[D]. 刘男男.扬州大学 2012
本文编号：3328984
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