检测牛奶中肠出血性大肠杆菌O157:H7的双抗夹心化学酶联免疫方法的建立
发布时间：2021-08-09 10:33
为了检测牛奶中肠出血性大肠杆菌（enterohemrrhagic Escherichia coil, EHEC）O157:H7污染,采用兔多抗作为捕捉抗体与一株O157:H7单克隆抗体作为检测抗体进行配对,构建了针对EHEC O157:H7的双抗夹心化学发光酶联免疫检测方法。该方法最低检测限可达到2.5×104 CFU/mL,优于ELISA检测方法,且特异性良好,与其他大肠杆菌、沙门菌、李斯特菌、阪崎肠杆菌等均无交叉反应。在用于牛奶样本的模拟添加检测中,较ELISA方法可缩短前增菌处理时间。本研究为牛奶中O157:H7污染检测提供了一种准确度高、特异性强的检测手段。
【文章来源】：畜牧与兽医. 2020,52(04)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
ELISA特异性试验结果
棋盘滴定法各条件组合P/N值
为探索CLEIA方法的最低检测限,将EHEC O157:H7纯培养菌液梯度稀释为10～108CFU/mL进行CLEIA试验,结果发现,P/N=2.1时菌液浓度在104～105CFU/mL的范围内,因此再次设置104、2.5×104、5×104及105CFU/mL 4个浓度梯度进行试验,结果如图2所示。当菌液浓度为2.5×104CFU/mL时,其P/N均值为2.55,接近且大于2.1,因此可认为该CLEIA方法的最低检测限为2.5×104CFU/mL。同时进行的ELISA试验,当菌液浓度为105CFU/mL时,P/N均值为2.37,因此认为其最低检测限为105CFU/mL。CLEIA和ELISA的标准曲线如图3、图4所示。随着菌液浓度的升高,化学发光值和OD450也相应地升高,其中CLEIA方法在2.5×104CFU/mL～108CFU/mL范围内呈线性关系,方程式为y=189 100x-736 700,R2=0.993 0;ELISA方法在105CFU/mL～108CFU/mL范围内呈线性关系。综上所述,CLEIA方法在灵敏度方面优于ELISA方法。
【参考文献】：
期刊论文
[1]双抗体夹心ELISA法检测食品中出血性大肠杆菌O15[J]. 黄海燕,陈亮,陈萍. 食品工业科技. 2016(11)
[2]双抗夹心ELISA检测食品中大肠杆菌O157:H7方法研究[J]. 葛萃萃,钟青萍,张旺,欧阳鑫. 食品科学. 2007(01)
硕士论文
[1]基于HCR及生物素—链霉亲和素信号放大系统检测大肠杆菌O157:H7的研究[D]. 郭琦.南昌大学 2017
本文编号：3331904
【文章来源】：畜牧与兽医. 2020,52(04)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
ELISA特异性试验结果
棋盘滴定法各条件组合P/N值
为探索CLEIA方法的最低检测限,将EHEC O157:H7纯培养菌液梯度稀释为10～108CFU/mL进行CLEIA试验,结果发现,P/N=2.1时菌液浓度在104～105CFU/mL的范围内,因此再次设置104、2.5×104、5×104及105CFU/mL 4个浓度梯度进行试验,结果如图2所示。当菌液浓度为2.5×104CFU/mL时,其P/N均值为2.55,接近且大于2.1,因此可认为该CLEIA方法的最低检测限为2.5×104CFU/mL。同时进行的ELISA试验,当菌液浓度为105CFU/mL时,P/N均值为2.37,因此认为其最低检测限为105CFU/mL。CLEIA和ELISA的标准曲线如图3、图4所示。随着菌液浓度的升高,化学发光值和OD450也相应地升高,其中CLEIA方法在2.5×104CFU/mL～108CFU/mL范围内呈线性关系,方程式为y=189 100x-736 700,R2=0.993 0;ELISA方法在105CFU/mL～108CFU/mL范围内呈线性关系。综上所述,CLEIA方法在灵敏度方面优于ELISA方法。
【参考文献】：
期刊论文
[1]双抗体夹心ELISA法检测食品中出血性大肠杆菌O15[J]. 黄海燕,陈亮,陈萍. 食品工业科技. 2016(11)
[2]双抗夹心ELISA检测食品中大肠杆菌O157:H7方法研究[J]. 葛萃萃,钟青萍,张旺,欧阳鑫. 食品科学. 2007(01)
硕士论文
[1]基于HCR及生物素—链霉亲和素信号放大系统检测大肠杆菌O157:H7的研究[D]. 郭琦.南昌大学 2017
本文编号：3331904
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