PCV-2的分离鉴定与Cap蛋白的原核表达

发布时间：2021-08-10 05:37

　　猪圆环病毒2型（Porcine circovirus-2，PCV-2）是目前为止发现最小的动物致病性病毒，是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病因之一，除此之外还能够引起母猪繁殖障碍、肠炎、断奶仔猪与育肥猪的呼吸道疾病等，这类疾病统称为猪圆环病毒病（PCVAD）。目前，该病在世界各养猪国家都有分布，是对养猪业造成重大危害的三大疫病之一。本研究针对从广东多个猪场采集的病料进行病毒分离并接种到PK-15细胞系传代培养，通过间接免疫荧光技术初步鉴定分离的毒株为PCV-2。采用RT-PCR，将已同步接种该病毒PK-15细胞总RNA进行反转录，根据GenBank中PCV-2序列（登录号：JQ809462.1）设计编码PCV-2结构蛋白全长的特异性引物，利用PCR技术，成功扩增出PCV-2ORF2基因，确定分离到的病毒为PCV-2。利用分子生物学技术将本实验室保存的PCV-2GD10-01毒株的ORF2基因连接到pMD-18T克隆载体上，根据限制性核酸内切酶酶切分析得重组质粒PCV2-Cap-T。经序列测定验证正确后，将目的基因连接到原核表达载体pET-28a-c（+），获得重组质粒p... 

【文章来源】：吉林农业大学吉林省

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一篇 文献综述
    第一章 猪圆环病毒病的研究进展
        1.1 圆环病毒感染相关疾病的病原学
        1.2 圆环病毒病的流行病学
        1.3 圆环病毒病的临床症状
        1.4 圆环病毒病的诊断技术
    第二章 圆环病毒的分子生物学研究进展
        2.1 圆环病毒的病原学研究
        2.2 圆环病毒的形态与结构
        2.3 圆环病毒的基因组结构
        2.4 圆环病毒的主要结构蛋白及其功能特点
    第三章 圆环病毒疫苗的研究进展
        3.1 传统疫苗的研究进展
        3.2 新型疫苗的研究进展
第二篇 研究内容
    第一章 PCV-2 病毒的分离与鉴定
        1.1 材料和方法
        1.2 结果
        1.3 讨论
        1.4 小结
    第二章 猪圆环病毒 2 型 ORF2 基因的原核表达及 Cap 蛋白的纯化
        2.1 材料
        2.2 方法
        2.3 结果
        2.4 讨论
    第三章 纯化的 Cap 与间接免疫荧光染色检测方法的建立
        3.1 材料
        3.2 主要仪器与试剂
        3.3 方法
        3.4 结果
        3.5 讨论
结论
参考文献
作者简介
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）的研制与应用[J]. 刘长明,危艳武,陆月华,黄立平,吴洪丽,张朝霞,温士刚,姜凤娟.  畜牧兽医科技信息. 2010(09)
[2]猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒的研制及应用[J]. 刘长明,张超范,危艳武,张朝霞,袁婧.  中国预防兽医学报. 2007(08)
[3]杭州地区猪Ⅱ型圆环病毒抗体的血清学调查[J]. 陈庆新,商绍彬,叶菊秀,母安雄,王毅峰,陆国林,周继勇.  中国兽医科技. 2003(07)
[4]江西省断奶仔猪圆环病毒感染的初步诊断[J]. 花象柏.  中国兽医科技. 2003(05)
[5]广西断奶仔猪猪圆环病毒2型的检测[J]. 黄伟坚,芦银华,覃广胜,蓝可耀,阮强,莫荣燕,温传新,张美,余克伦.  中国兽医科技. 2003(01)
[6]规模化猪场猪圆环病毒2型感染的流行病学调查[J]. 王忠田,杨汉春,郭鑫.  中国兽医杂志. 2002(10)
[7]断奶猪多系统衰弱综合征血清抗体检测[J]. 郎洪武,张广川,吴发权,张创贵.  中国兽医科技. 2000(03)



本文编号：3333571