日本血吸虫高迁移率族蛋白（SjHMGB1）免疫生物学功能的初步研究
发布时间：2021-08-10 16:44
日本血吸虫病是种危害严重的人畜共患疾病，对人类健康和社会经济发展存在不利影响。高效、安全的抗血吸虫病疫苗的研制是实现控制、消灭血吸虫病的有效途径。辐照致弱血吸虫尾蚴和童虫疫苗（RAV）能诱导宿主产生高保护性效应，但不适于直接应用，所以通过模拟RAV诱导的高保护性效应机制研发安全可靠的疫苗可能是解决血防难题的策略之，而RAV免疫原性分子和细胞基础及机制的研究是探索RAV高保护性效应机制的切入点之。RAV免疫可诱导宿主产生以Th1为优势免疫应答的抗攻击感染效果，而正常尾蚴则不能诱导这种保护性效应。宿主对RAV的应答模式可能与虫体特征性抗原表达及宿主特征性的先天和获得性免疫应答相关。高迁移率族蛋白B1（HMGB1）是种保守的内源性核内蛋白，在受到某些刺激后，HMGB1分子可以转到细胞外发挥生物学作用。多项研究表明，HMGB1与宿主感染性免疫反应有关，可以介导宿主树突状细胞（DCs）成熟和诱导T细胞向Th1型极化。因此，我们推测在RAV模型中，虫体细胞的凋亡坏死及虫源性HMGB1应急分子等在诱导高保护性效应方面发挥了关键作用。因此，本研究初步比较了SjHMGB1在正常日本血吸虫不同发育阶段虫体...
【文章来源】：上海师范大学上海市
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 绪论
1.1 血吸虫的生物学概述
1.1.1 血吸虫及其分布
1.1.2 日本血吸虫的生活史
1.1.3 血吸虫与宿主的相互作用
1.2 血吸虫疫苗的研究进展
1.2.1 血吸虫疫苗研究的意义
1.2.2 辐照致弱血吸虫疫苗研究进展
1.2.3 辐照致弱血吸虫尾蚴疫苗的作用机制
1.3 HMGB1 分子的生物学特性
1.3.1 HMGB1 分子的结构和功能特征
1.3.2 HMGB1 的免疫生物学功能
1.4 细胞凋亡与坏死
1.4.1 常用检测方法
1.4.2 血吸虫的细胞凋亡研究
1.4.3 细胞的免疫原性死亡
第二章 SjHMGB1 的原核表达及其免疫原性分析
2.1 实验材料
2.1.1 菌株
2.1.2 实验动物
2.1.3 主要试剂和仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 SjHMGB1 引物设计和目的片段扩增
2.2.2 pET28a(+)-SjHMGB1 重组载体的构建
2.2.3 SjHMGB1 重组蛋白的表达
2.2.4 SjHMGB1 蛋白的表达纯化
2.2.5 SjHMGB1 蛋白的鉴定
2.2.6 SjHMGB1 蛋白的免疫原性分析
2.3 实验结果
2.3.1 SjHMGB1 基因的克隆和重组载体鉴定
2.3.2 SjHMGB1 蛋白的表达
2.3.3 SjHMGB1 重组蛋白的纯化和鉴定
2.3.4 SjHMGB1 重组蛋白免疫原性鉴定
2.4 讨论
第三章 SjHMGB1 蛋白在日本血吸虫中的表达研究
3.1 实验材料
3.1.1 相关试剂和仪器
3.1.2 钉螺和实验动物
3.2 实验方法
3.2.1 不同发育阶段日本血吸虫虫体收集
3.2.2 切片制备
3.2.3 SjHMGB1 在不同时期虫体中的分布
3.3 实验结果
3.4 讨论
第四章 SjHMGB1 在杆状病毒表达系统中的表达
4.1 实验材料
4.1.1 载体、细胞和菌种
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.2 方法
4.2.1 引物设计
4.2.2 pFastBacHTA-SjHMGB1 转移载体的构建
4.2.3 重组穿梭质粒 Bacmid-SjHMGB1 的构建和鉴定
4.2.4 重组 Bacmid-SjHMGB1 质粒转染 Sf9 昆虫细胞
4.2.5 间接免疫荧光检测重组 SjHMGB1 蛋白在 Sf9 细胞中的表达
4.2.6 SjHMGB1 重组蛋白的纯化和鉴定
4.3 实验结果
4.3.1 pFastBacHTA-SjHMGB1 转移载体的构建
4.3.2 重组穿梭质粒 pFastBacHTA-SjHMGB1 的构建和鉴定
4.3.3 SjHMGB1 重组蛋白在 Sf9 中的表达鉴定
4.4 讨论
第五章 SjHMGB1 活化 DC 表型成熟的研究
5.1 实验材料
5.1.1 实验动物
5.1.2 实验试剂及耗材
5.1.3 仪器设备
5.2 实验方法
5.2.1 制备 BMDC
5.2.2 SjHMGB1 刺激 BMDC
5.2.3 流式细胞术检测 BMDC 表型成熟
5.3 实验结果
5.4 讨论
第六章 辐照致弱日本血吸虫的凋亡坏死研究
6.1 实验材料
6.1.1 实验动物
6.1.2 主要试剂和和耗材
6.1.3 实验仪器
6.1.4 溶液配制
6.2 实验方法
6.2.1 尾蚴的收集与处理
6.2.2 不同时期血吸虫凋亡与坏死的超微结构观察
6.2.3 不同时期童虫细胞的凋亡检测
6.3 实验结果
6.3.1 不同时期血吸虫凋亡与坏死的超微结构观察
6.3.2 流式细胞仪检测不同时期童虫细胞的凋亡情况
6.4 讨论
第七章 全文总结
致谢
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]肿瘤细胞免疫原性死亡相关分子的研究进展[J]. 王清,王艳林. 细胞与分子免疫学杂志. 2013(01)
[2]细胞凋亡、坏死、自噬的检测方法与技术[J]. 卢建美,赵云峰. 滨州学院学报. 2012(06)
[3]日本血吸虫钙网织蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达及其活化树突细胞的初步分析[J]. 李莹,李运燕,徐瑞敏,苑纯秀,杨健美,林矫矫,李利珍,冯新港. 中国动物传染病学报. 2012(04)
[4]血吸虫疫苗研究现状和发展方向[J]. 李东,朱珠,张旻,韩彦辉. 北京农业. 2011(12)
[5]细胞凋亡常用检测方法的研究进展[J]. 郭延锋,高均伟,朱国坡,刘兴友. 中国畜牧兽医. 2010(02)
[6]细菌脂多糖的生物活性及作用机制[J]. 刘中原,李延平. 医学综述. 2010(02)
[7]2006年湖北省国家级血吸虫病监测点疫情监测[J]. 苏正明,刘建兵,蔡顺祥,涂祖武,代凌峰,何汇,范宏萍. 中国血吸虫病防治杂志. 2007(06)
[8]血吸虫反向疫苗学理论与技术的研究现状与展望[J]. 冯新港,隋传宇,苑纯秀,邵东华,陈进新,林矫矫. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2007(03)
[9]高迁移率族蛋白B1对树突细胞作用的受体机制研究[J]. 徐姗,姚咏明,董宁,刘峰,于燕,盛志勇. 解放军医学杂志. 2007(05)
[10]致弱血吸虫尾蚴免疫和早期化疗诱导宿主产生高保护性现象及其效应机制的研究[J]. 胡姝颖,吴海玮. 国际医学寄生虫病杂志. 2006(02)
博士论文
[1]HMGB1在电离辐射损伤中的作用与相关机制研究[D]. 王利利.苏州大学 2011
[2]致弱日本血吸虫尾蚴诱导小鼠免疫保护机制研究[D]. 周霞.苏州大学 2010
[3]不同宿主来源日本血吸虫童虫差异表达基因的研究[D]. 彭金彪.中国农业科学院 2010
硕士论文
[1]日本血吸虫应急分子热休克蛋白70（SjHSP70）免疫生物学功能研究[D]. 徐瑞敏.中国农业科学院 2013
[2]日本血吸虫钙网织蛋白活化抗原提呈细胞功能的分析[D]. 李莹.上海师范大学 2012
[3]日本血吸虫童虫期抗原分子的筛选及其Th细胞表位的鉴定[D]. 赵犇鹏.上海师范大学 2011
本文编号：3334421
【文章来源】：上海师范大学上海市
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 绪论
1.1 血吸虫的生物学概述
1.1.1 血吸虫及其分布
1.1.2 日本血吸虫的生活史
1.1.3 血吸虫与宿主的相互作用
1.2 血吸虫疫苗的研究进展
1.2.1 血吸虫疫苗研究的意义
1.2.2 辐照致弱血吸虫疫苗研究进展
1.2.3 辐照致弱血吸虫尾蚴疫苗的作用机制
1.3 HMGB1 分子的生物学特性
1.3.1 HMGB1 分子的结构和功能特征
1.3.2 HMGB1 的免疫生物学功能
1.4 细胞凋亡与坏死
1.4.1 常用检测方法
1.4.2 血吸虫的细胞凋亡研究
1.4.3 细胞的免疫原性死亡
第二章 SjHMGB1 的原核表达及其免疫原性分析
2.1 实验材料
2.1.1 菌株
2.1.2 实验动物
2.1.3 主要试剂和仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 SjHMGB1 引物设计和目的片段扩增
2.2.2 pET28a(+)-SjHMGB1 重组载体的构建
2.2.3 SjHMGB1 重组蛋白的表达
2.2.4 SjHMGB1 蛋白的表达纯化
2.2.5 SjHMGB1 蛋白的鉴定
2.2.6 SjHMGB1 蛋白的免疫原性分析
2.3 实验结果
2.3.1 SjHMGB1 基因的克隆和重组载体鉴定
2.3.2 SjHMGB1 蛋白的表达
2.3.3 SjHMGB1 重组蛋白的纯化和鉴定
2.3.4 SjHMGB1 重组蛋白免疫原性鉴定
2.4 讨论
第三章 SjHMGB1 蛋白在日本血吸虫中的表达研究
3.1 实验材料
3.1.1 相关试剂和仪器
3.1.2 钉螺和实验动物
3.2 实验方法
3.2.1 不同发育阶段日本血吸虫虫体收集
3.2.2 切片制备
3.2.3 SjHMGB1 在不同时期虫体中的分布
3.3 实验结果
3.4 讨论
第四章 SjHMGB1 在杆状病毒表达系统中的表达
4.1 实验材料
4.1.1 载体、细胞和菌种
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.2 方法
4.2.1 引物设计
4.2.2 pFastBacHTA-SjHMGB1 转移载体的构建
4.2.3 重组穿梭质粒 Bacmid-SjHMGB1 的构建和鉴定
4.2.4 重组 Bacmid-SjHMGB1 质粒转染 Sf9 昆虫细胞
4.2.5 间接免疫荧光检测重组 SjHMGB1 蛋白在 Sf9 细胞中的表达
4.2.6 SjHMGB1 重组蛋白的纯化和鉴定
4.3 实验结果
4.3.1 pFastBacHTA-SjHMGB1 转移载体的构建
4.3.2 重组穿梭质粒 pFastBacHTA-SjHMGB1 的构建和鉴定
4.3.3 SjHMGB1 重组蛋白在 Sf9 中的表达鉴定
4.4 讨论
第五章 SjHMGB1 活化 DC 表型成熟的研究
5.1 实验材料
5.1.1 实验动物
5.1.2 实验试剂及耗材
5.1.3 仪器设备
5.2 实验方法
5.2.1 制备 BMDC
5.2.2 SjHMGB1 刺激 BMDC
5.2.3 流式细胞术检测 BMDC 表型成熟
5.3 实验结果
5.4 讨论
第六章 辐照致弱日本血吸虫的凋亡坏死研究
6.1 实验材料
6.1.1 实验动物
6.1.2 主要试剂和和耗材
6.1.3 实验仪器
6.1.4 溶液配制
6.2 实验方法
6.2.1 尾蚴的收集与处理
6.2.2 不同时期血吸虫凋亡与坏死的超微结构观察
6.2.3 不同时期童虫细胞的凋亡检测
6.3 实验结果
6.3.1 不同时期血吸虫凋亡与坏死的超微结构观察
6.3.2 流式细胞仪检测不同时期童虫细胞的凋亡情况
6.4 讨论
第七章 全文总结
致谢
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]肿瘤细胞免疫原性死亡相关分子的研究进展[J]. 王清,王艳林. 细胞与分子免疫学杂志. 2013(01)
[2]细胞凋亡、坏死、自噬的检测方法与技术[J]. 卢建美,赵云峰. 滨州学院学报. 2012(06)
[3]日本血吸虫钙网织蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达及其活化树突细胞的初步分析[J]. 李莹,李运燕,徐瑞敏,苑纯秀,杨健美,林矫矫,李利珍,冯新港. 中国动物传染病学报. 2012(04)
[4]血吸虫疫苗研究现状和发展方向[J]. 李东,朱珠,张旻,韩彦辉. 北京农业. 2011(12)
[5]细胞凋亡常用检测方法的研究进展[J]. 郭延锋,高均伟,朱国坡,刘兴友. 中国畜牧兽医. 2010(02)
[6]细菌脂多糖的生物活性及作用机制[J]. 刘中原,李延平. 医学综述. 2010(02)
[7]2006年湖北省国家级血吸虫病监测点疫情监测[J]. 苏正明,刘建兵,蔡顺祥,涂祖武,代凌峰,何汇,范宏萍. 中国血吸虫病防治杂志. 2007(06)
[8]血吸虫反向疫苗学理论与技术的研究现状与展望[J]. 冯新港,隋传宇,苑纯秀,邵东华,陈进新,林矫矫. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2007(03)
[9]高迁移率族蛋白B1对树突细胞作用的受体机制研究[J]. 徐姗,姚咏明,董宁,刘峰,于燕,盛志勇. 解放军医学杂志. 2007(05)
[10]致弱血吸虫尾蚴免疫和早期化疗诱导宿主产生高保护性现象及其效应机制的研究[J]. 胡姝颖,吴海玮. 国际医学寄生虫病杂志. 2006(02)
博士论文
[1]HMGB1在电离辐射损伤中的作用与相关机制研究[D]. 王利利.苏州大学 2011
[2]致弱日本血吸虫尾蚴诱导小鼠免疫保护机制研究[D]. 周霞.苏州大学 2010
[3]不同宿主来源日本血吸虫童虫差异表达基因的研究[D]. 彭金彪.中国农业科学院 2010
硕士论文
[1]日本血吸虫应急分子热休克蛋白70（SjHSP70）免疫生物学功能研究[D]. 徐瑞敏.中国农业科学院 2013
[2]日本血吸虫钙网织蛋白活化抗原提呈细胞功能的分析[D]. 李莹.上海师范大学 2012
[3]日本血吸虫童虫期抗原分子的筛选及其Th细胞表位的鉴定[D]. 赵犇鹏.上海师范大学 2011
本文编号：3334421
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