山羊骨骼肌表达载体plMAU-EGFP的构建

发布时间：2021-08-11 08:35

　　目前尚缺乏研究山羊肉品质基因的适宜模型，有关山羊肉分子机理的研究还相对落后。鉴于转基因技术存在一系列潜在危险且改变基因组难度较大，本论文借鉴人类基因治疗的理念和原理构建了适合携带外源基因的山羊骨骼肌特异表达载体。我们利用骨骼肌α-肌动蛋白的调控原件，肌肉钙粘蛋白M-cadherin的信号肽以及EGFP基因共同构建了可以直接在动物体肌肉细胞内异位表达并分泌EGFP的表达质粒pGEM-A5A3f-M-EGFP（pIMAU-EGFP）。该载体的构建为研究山羊肉肉品质基因奠定了重要的基础。本研究得出的结论如下：1、成功获得本研究中的转录起始单元：骨骼肌α-肌动蛋白启动子5’-侧翼区核苷酸序列，大小为2440bp以及大小为816bp的携带Ploy（A）尾的骨骼肌α-肌动蛋白启动子3-’侧翼区核苷酸序列。通过测序验证，表明构建的表达载体中这部分元件是正确可靠的，可以行使转录驱动功能。2、根据Genbank登录号为：NM₀07662的参考序列，人工合成含有63bp的M-cadherin基因序列，限制性酶切位点，以及与EGFP基因有20bp重叠区的大引物M-m-cadherin，... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

启动子的结构

e）和钙离子与水母发光蛋白结合后，水母发光蛋白发发绿色荧光[17]，马丁沙尔菲进一步研究了绿色荧光蛋白蛋白的改造则使绿色荧光蛋白得到了更广泛的应用，献，上述3位学者共同获得了2008年的诺贝尔化学奖所组成的单体蛋白，相对分子质量为27kD，用 395nm的在508nm处自行发射绿色荧光。然而，人们对GFP的真正明它可以作为一种分子标记物以后[18]。随后，形成了亮度进行筛选或者通过改变光谱（转向红色或蓝色）染色体结构上两个单一氨基酸的改变（F64L, S65T）好的密码子进行了优化，这类突变体被命名为增强型的研究证明EGFP产生的绿色荧光强度比野生型的GFP究中EGFP作为一种报告基因用于载体的构建，虽然基因

在骨骼肌的再生过程中，M-cadherin上调且可被再生肌原结构所识别。图4 基于钙粘蛋白的细胞连接的结构蛋白的主要相互作用Fig.4 The cadherin cell connected structural proteins interaction

【参考文献】：
期刊论文
[1]我国肉羊生产存在的问题及发展趋势[J]. 彭华.  当代畜牧. 2007(05)
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硕士论文
[1]波尔山羊肌肉组织学性状与肉品理化性状的研究[D]. 刘建伟.河北农业大学 2007



本文编号：3335845