布鲁菌转录调节因子HFQ诱导机体免疫反应的分析

发布时间：2021-08-11 10:24

　　旨在分析布鲁菌（Brucella）转录调节因子HFQ诱导机体产生的免疫反应。以热灭活牛种布鲁菌S2308为模板,根据GenBank登录的S2308 hfq基因序列（BAB1₁134）设计引物,PCR扩增hfq基因片段后,将其克隆至原核表达载体pET-32a,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,诱导HFQ蛋白表达;利用SDS-PAGE电泳以及Western blot对重组HFQ蛋白（rHFQ）进行分析;pET-32a空载体、rHFQ和疫苗株M5-90刺激小鼠巨噬细胞RAW 264.7,利用ELISA试剂盒检测细胞因子IFN-γ和IL-4的表达水平;将pET-32a、rHFQ和M5-90免疫小鼠后,检测小鼠脾细胞中IFN-γ和IL-4的水平,以及小鼠血清中IgG抗体水平。结果显示,hfq基因大小为237 bp,编码79个氨基酸,rHFQ大约在25.8 ku处出现蛋白条带,纯化后为单一条带。Western blot结果显示,rHFQ具有较好的反应原性。rHFQ刺激RAW 264.7后,诱导IFN-γ和IL-4的水平与M5-90组相似,显著高于PBS组和pET-32... 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(08)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

hfq基因的PCR扩增

表达蛋白经AKTAxpress智能多维纯化系统纯化后进行SDS-PAGE检测,结果显示,在相应位置出现单一蛋白条带,rHFQ的纯化效果较好(图3A)。对纯化蛋白进行Western blot分析,结果显示,在大约25.8 ku处出现特异性反应条带(图3B),表明rHFQ具有良好的反应原性。2.3 小鼠巨噬细胞RAW 264.7中的细胞因子检测

rHFQ的SDS-PAGE和Western blot分析

【参考文献】：
期刊论文
[1]基于转录组测序筛选鼠伤寒沙门菌hfq基因缺失菌的差异表达基因[J]. 杨阳,杨琦,董然然,潘永,李晨,刘丽娟,文明,周碧君,王开功.  畜牧兽医学报. 2019(12)
[2]嗜水气单胞菌hfq2基因对生物被膜形成的影响[J]. 王贵宾,蔡奇岚,李泽琦,赵怡扬,林镇平,林向民.  科学通报. 2019(14)
[3]维氏气单胞菌的smpB、tmRNA及hfq敲除菌株减毒活疫苗筛选[J]. 徐一轲,孙愉宸,盛强龙,李宏,马香,唐燕琼,刘柱.  山东农业大学学报(自然科学版). 2019(02)



本文编号：3335989