蒙古牛和水牛BTG2启动子的克隆及功能分析
发布时间：2021-08-11 23:18
BTG2是新型细胞抗增殖因子BTG/TOB基因家族成员之一,它是由神经生长因子诱导表达产生的一种分泌蛋白,属于瞬时早期反应基因。BTG2在猪和牛中均存在品种和个体表达差异。本研究选择蒙古牛和水牛BTG2启动子区进行研究,以阐明蒙古牛和水牛BTG2差异表达分子机理,获得如下结果：以蒙古牛和水牛基因组DNA为模板,分别克隆获得蒙古牛和水牛1708bp、1478bp的BTG2启动子序列。序列比对结果显示,相对于蒙古牛,水牛BTG2启动子存在269bp的缺失,生物信息学分析发现,该序列存在多个转录因子结合位点,这为后续多态性分析和功能鉴定奠定了基础。将蒙古牛和水牛BTG2启动子序列分别重组到哺乳动物表达载体pEGFP-N1中,获得瞬时表达载体pBTG2（p）-EGFP,并将它们分别导入HeLa细胞,神经生长因子诱导后,均检测到报道基因GFP表达,且蒙古牛BTG2启动子转录活性高于水牛,由此推测,水牛BTG2启动子区缺失的269bp片段很可能是导致该现象的根本原因。利用qRT-PCR检测BTG2在水牛、蒙古牛肌肉组织中的实时表达状况,由此揭示BTG2启动子区269bp缺失是否影响其转录。研究结果...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BTG/TOB家族蛋白序列示意图
图2 BTG2代谢网络Fig 2 The metabolism network of BTG2启动子研究进展. 1启动子概述启动子（Promoter)是与基因表达启动相关的顺式作用元件，是结构基因的成部分。它是一段具有独立功能的DNA序列，位于转录起始位点5 ‘端上游区具有活化RNA聚合酶的作用，使之与模板DNA准确地相结合，且具有转录特异性【3”。启动子具有以下四个显著特征：首先它具有序列特异性。通常几和结构都相对保守的序列框位于启动子中，启动子的功能会因序列框中碱基而影响。其次它具有严格的方向性。启动子作为一种具有有方向性的顺式调控，即在正、反两个方向中只能有一个具有启动子的功能，因此如果改变了它的就会使它失去启动的能力。位置特异性是启动子的特点之一。大多数启动子位调控基因的上游区，也有一些启动子位于基因编码区的前端，如果启动子离开
蒙古牛和水牛启动子的克隆及功能分析点都制约着电转染法的应用与推广””。杨东山等将带有绿色焚光霉素抗性基因的人胰岛素乳腺特异表达载体通过电转染法将其转染到胎儿成纤维细胞中，从而获得了核供体转基因细胞，该细胞可用于转研究。马晓霞等^=同样釆用电转染法将体外合成的融合基因的染至K562细胞株中，其转染效率可达到70%。Satoshi 胎儿成纤维细胞进行了电转染实验，从而获得了转基因细胞系，为转研究及产生奠定了基础。
【参考文献】：
期刊论文
[1]动物启动子的研究策略[J]. 冯政,梅书棋,武华玉,彭先文,孙华,李良华. 河南农业科学. 2012(12)
[2]家畜基因启动子调控功能的研究进展[J]. 赵曼,陈宁博,杜芳,马云. 家畜生态学报. 2012(06)
[3]乌珠穆沁羊成肌细胞的诱导分化及相关基因表达[J]. 魏彩虹,王皓,杜立新,李发弟. 农业生物技术学报. 2012(03)
[4]牛MyoG基因启动子的克隆及功能的初步分析[J]. 王秋华,曹允考,李树峰,佟慧丽,兴孝友,李光鹏,严云勤. 畜牧兽医学报. 2012(01)
[5]BTG1 as a New Candidate Gene for Muscle Growth in Pigs: Cloning,Expression and Association Analysis[J]. M. F. Rothschild. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2011(03)
[6]牛Gtl2基因cDNA序列分析及启动子预测[J]. 苏红,侯晓慧,李世杰. 河北农业大学学报. 2011(04)
[7]CMV启动子指导pDsRed2-1基因在牛胎儿成纤维细胞中的表达[J]. 杜雪,张东,周欢敏. 内蒙古农业大学学报(自然科学版). 2011(02)
[8]牛GDF5基因启动子的克隆与序列分析[J]. 刘永峰,昝林森,赵栓平,亐开兴,李林强,张莺莺,唐中林,杨述林,牟玉莲,崔文涛. 畜牧兽医学报. 2010(04)
[9]采用微卫星标记分析13个中外牛品种的遗传变异和品种间的遗传关系[J]. 罗永发,王志刚,李加琪,张桂香,陈瑶生,梁勇,于福清,宋卫涛,张自富. 生物多样性. 2006(06)
[10]牛胎儿成纤维细胞的组织块贴附法分离培养与电穿孔法基因转染[J]. 杨东山,杜晨光,高飞,旭日干. 动物学研究. 2006(01)
硕士论文
[1]鸡wdr72基因的离体克隆表达和体内表达特征[D]. 李炳熠.浙江农林大学 2012
[2]猪DNMTs基因在肌肉和脂肪组织中的表达差异[D]. 巫英燕.四川农业大学 2011
[3]猪成纤维细胞脂质体或电穿孔转染pEGFP-N1条件的优化[D]. 季索菲.安徽农业大学 2011
[4]结核分枝杆菌旋转酶B亚基与DNA相互作用研究[D]. 宋辉.华中农业大学 2010
[5]牛Myf6基因克隆及在成肌细胞中的表达[D]. 汤展毅.东北农业大学 2010
[6]水牛FSHR基因与其表达检测的研究[D]. 牛金涛.广西大学 2007
[7]快速检测β-珠蛋白基因突变的荧光定量PCR技术的建立及应用[D]. 周代锋.华南热带农业大学 2007
本文编号：3337091
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BTG/TOB家族蛋白序列示意图
图2 BTG2代谢网络Fig 2 The metabolism network of BTG2启动子研究进展. 1启动子概述启动子（Promoter)是与基因表达启动相关的顺式作用元件，是结构基因的成部分。它是一段具有独立功能的DNA序列，位于转录起始位点5 ‘端上游区具有活化RNA聚合酶的作用，使之与模板DNA准确地相结合，且具有转录特异性【3”。启动子具有以下四个显著特征：首先它具有序列特异性。通常几和结构都相对保守的序列框位于启动子中，启动子的功能会因序列框中碱基而影响。其次它具有严格的方向性。启动子作为一种具有有方向性的顺式调控，即在正、反两个方向中只能有一个具有启动子的功能，因此如果改变了它的就会使它失去启动的能力。位置特异性是启动子的特点之一。大多数启动子位调控基因的上游区，也有一些启动子位于基因编码区的前端，如果启动子离开
蒙古牛和水牛启动子的克隆及功能分析点都制约着电转染法的应用与推广””。杨东山等将带有绿色焚光霉素抗性基因的人胰岛素乳腺特异表达载体通过电转染法将其转染到胎儿成纤维细胞中，从而获得了核供体转基因细胞，该细胞可用于转研究。马晓霞等^=同样釆用电转染法将体外合成的融合基因的染至K562细胞株中，其转染效率可达到70%。Satoshi 胎儿成纤维细胞进行了电转染实验，从而获得了转基因细胞系，为转研究及产生奠定了基础。
【参考文献】：
期刊论文
[1]动物启动子的研究策略[J]. 冯政,梅书棋,武华玉,彭先文,孙华,李良华. 河南农业科学. 2012(12)
[2]家畜基因启动子调控功能的研究进展[J]. 赵曼,陈宁博,杜芳,马云. 家畜生态学报. 2012(06)
[3]乌珠穆沁羊成肌细胞的诱导分化及相关基因表达[J]. 魏彩虹,王皓,杜立新,李发弟. 农业生物技术学报. 2012(03)
[4]牛MyoG基因启动子的克隆及功能的初步分析[J]. 王秋华,曹允考,李树峰,佟慧丽,兴孝友,李光鹏,严云勤. 畜牧兽医学报. 2012(01)
[5]BTG1 as a New Candidate Gene for Muscle Growth in Pigs: Cloning,Expression and Association Analysis[J]. M. F. Rothschild. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2011(03)
[6]牛Gtl2基因cDNA序列分析及启动子预测[J]. 苏红,侯晓慧,李世杰. 河北农业大学学报. 2011(04)
[7]CMV启动子指导pDsRed2-1基因在牛胎儿成纤维细胞中的表达[J]. 杜雪,张东,周欢敏. 内蒙古农业大学学报(自然科学版). 2011(02)
[8]牛GDF5基因启动子的克隆与序列分析[J]. 刘永峰,昝林森,赵栓平,亐开兴,李林强,张莺莺,唐中林,杨述林,牟玉莲,崔文涛. 畜牧兽医学报. 2010(04)
[9]采用微卫星标记分析13个中外牛品种的遗传变异和品种间的遗传关系[J]. 罗永发,王志刚,李加琪,张桂香,陈瑶生,梁勇,于福清,宋卫涛,张自富. 生物多样性. 2006(06)
[10]牛胎儿成纤维细胞的组织块贴附法分离培养与电穿孔法基因转染[J]. 杨东山,杜晨光,高飞,旭日干. 动物学研究. 2006(01)
硕士论文
[1]鸡wdr72基因的离体克隆表达和体内表达特征[D]. 李炳熠.浙江农林大学 2012
[2]猪DNMTs基因在肌肉和脂肪组织中的表达差异[D]. 巫英燕.四川农业大学 2011
[3]猪成纤维细胞脂质体或电穿孔转染pEGFP-N1条件的优化[D]. 季索菲.安徽农业大学 2011
[4]结核分枝杆菌旋转酶B亚基与DNA相互作用研究[D]. 宋辉.华中农业大学 2010
[5]牛Myf6基因克隆及在成肌细胞中的表达[D]. 汤展毅.东北农业大学 2010
[6]水牛FSHR基因与其表达检测的研究[D]. 牛金涛.广西大学 2007
[7]快速检测β-珠蛋白基因突变的荧光定量PCR技术的建立及应用[D]. 周代锋.华南热带农业大学 2007
本文编号：3337091
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