猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9蛋白多克隆抗体的制备及其中和活性研究

发布时间：2021-08-13 03:33

　　为了制备猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）Nsp9蛋白鼠源多克隆抗体并检验其中和活性,试验采用RT-PCR方法扩增了PRRSV的Nsp9基因保守区域片段,将其克隆至原核表达载体pET-28a中,并在大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中表达重组Nsp9蛋白;纯化后的重组Nsp9蛋白与弗氏佐剂充分混合乳化,采用皮下多点注射免疫Balb/c小鼠,经3次免疫后获得多克隆抗体;用间接ELISA法检测抗体效价,以血清中和试验和间接免疫荧光试验检验其中和活性。结果表明:试验成功扩增了大小为951 bp的Nsp9基因片段,经双酶切和序列测定,重组表达质粒pET-28a-Nsp9构建成功;重组Nsp9蛋白的分子质量约为36.0 ku;制备的多克隆抗体效价较高,重组Nsp9蛋白多克隆抗体经2～8倍倍比稀释时,与PBS对照相比荧光数量递增。说明在大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中成功表达了PRRSV重组Nsp9蛋白,制备的鼠源多克隆抗体有一定的抗PRRSV中和活性。 

【文章来源】：黑龙江畜牧兽医. 2020,(11)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

间接免疫荧光试验结果(40 μm)

Nsp9基因片段PCR扩增结果

用限制性内切酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切重组表达质粒,结果得到大小约为 951 bp的目的基因条带和 5 400 bp的载体基因条带(见图2),表明试验成功构建出重组表达质粒pET-28a-Nsp9。2.3 重组Nsp9蛋白表达及纯化

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪繁殖与呼吸系统综合征病毒华南株GDgz的分离鉴定及遗传进化分析[J]. 于林洋,董建国,张乐宜,刘燕玲,梁鹏帅,王磊,宋长绪.  广东农业科学. 2017(04)
[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒FS株Nsp9基因的克隆与序列分析[J]. 赵孟孟,宋中宝,冯松林,王文佳,邢星,冯嘉萍,张桂红.  中国畜牧兽医. 2016(09)



本文编号：3339656