牦牛BNBD4组织分布及其蛋白特性的研究
发布时间：2021-08-13 04:59
为探究牦牛中性粒细胞β防御素4（BNBD4）在牦牛组织中的分布情况以及BNBD4的蛋白特性,本研究采用RT-PCR技术扩增获得牦牛BNBD4基因序列,利用生物信息学软件预测其编码蛋白的结构与功能,结果显示,牦牛BNBD4基因开放阅读框为195 bp,编码64个氨基酸,其序列与黄牛和水牛的相似性分别为96.4%和87.7%,其在同属中具有高度的保守性。蛋白功能与结构预测结果显示,该蛋白属于分泌型阳离子β防御素,其可与病原体的磷脂膜结合,从而破坏病原体细胞膜的完整性。通过荧光定量PCR检测BNBD4在牦牛5种组织中的转录水平,结果显示该基因在牦牛肾脏的转录水平极显著高于心、肝、脾和肺（p<0.01）,其次该基因在肝脏中的转录水平相对较高。构建重组表达质粒pET32a-BNBD4并诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE和western blot鉴定分析,结果显示,BNBD4重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,重组蛋白约为23 ku。进一步将pET32a-BNBD4/BL21（DE3）经IPTG诱导后于LB平板过夜培养,观察各组菌落数,分析BNBD4对E. coli BL21（DE3...
【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(10)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
重组质粒p ET32a-BNBD4酶切鉴定
将重组质粒转化E.coli BL21(DE3）感受态细胞，诱导12 h后收集表达产物，进行SDS-PAGE检测，出现大小约为23 ku的重组蛋白，而阴性对照在相应位置未见明显条带（图5A）。目的蛋白存在于破碎后的沉淀中，表明该蛋白主要以包涵体形式表达。Western blot鉴定结果显示明显的特异性蛋白印迹带（图5B）。表明正确表达了BNBD4重组蛋白。2.7 重组蛋白BNBD4的毒性试验
重组蛋白BNBD4对大肠杆菌的毒性试验结果显示，5×107cfu/m L、5×106cfu/m L、5×105cfu/m L、5×104cfu/m L浓度的重组菌菌落均明显少于对照组（图6），表明重组蛋白BNBD4对大肠杆菌BL21(DE3）具有明显的抑制作用。3 讨论
【参考文献】：
期刊论文
[1]蓝狐β-防御素1基因（vBD1）的真核表达及其抑菌活性分析[J]. 铁宇娟,刘陶林,蔡卉,王东阳,刘志平,田丽红. 中国预防兽医学报. 2019(05)
[2]小鼠β防御素4体外对人呼吸道合胞病毒抑制作用研究[J]. 张科,林勇平,刘兴德,胡志伟,牟荣,吴家红,罗语思. 中国病原生物学杂志. 2018(07)
[3]牛源防御素类抗菌肽的生物信息学分析[J]. 张炜,杭柏林,董萌萌,胡斌,徐彦召,张慧辉,胡建和. 现代畜牧兽医. 2018(07)
[4]川芎嗪对LPS致伤奶牛子宫内膜上皮细胞的TLR4和BNBD4 mRNA表达的影响[J]. 王自力,蒋会会,张翥,魏学良,别应堂,张家骅. 中国兽药杂志. 2015(12)
[5]β防御素在牛健康组织和病变组织中的分布[J]. 杨宇琴,王细花,吕悦,程广宇,周向梅. 畜牧与兽医. 2015(12)
[6]人β防御素4对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响[J]. 曹玉红,张静怡,张光运,曹艳华. 西部医学. 2015(05)
[7]荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的差异表达[J]. 程兰玲,曹贵方,温世勇,赵鹏伟,关洪敏,菅瑞珍. 中国畜牧兽医. 2012(06)
[8]鸭β-防御素4cDNA的克隆、表达及其抑菌活性的初步分析[J]. 蔺利娟,韩宗玺,邵昱昊,张可心,刘胜旺,李子瑞,马得莹. 畜牧兽医学报. 2011(09)
[9]重组人β防御素4的原核表达、纯化及抗铜绿假单胞菌活性初探[J]. 甘晓琴,伍素华,罗向东,杨成,吴燕. 第三军医大学学报. 2009(10)
[10]牦牛分类地位研究概述[J]. 李齐发,赵兴波,刘红林,李宁,谢庄. 动物分类学报. 2006(03)
博士论文
[1]牛中性粒细胞β-防御素4和5成熟肽的毕赤酵母表达及其抗分枝杆菌活性研究[D]. 康静静.中国农业大学 2014
硕士论文
[1]鸡β-防御素Gal-4基因的原核表达及重组蛋白抑菌活性检测[D]. 史瑞军.塔里木大学 2019
[2]奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及β-防御素4和5对其抑菌活性研究[D]. 李丽好.河北农业大学 2018
本文编号：3339794
【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(10)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
重组质粒p ET32a-BNBD4酶切鉴定
将重组质粒转化E.coli BL21(DE3）感受态细胞，诱导12 h后收集表达产物，进行SDS-PAGE检测，出现大小约为23 ku的重组蛋白，而阴性对照在相应位置未见明显条带（图5A）。目的蛋白存在于破碎后的沉淀中，表明该蛋白主要以包涵体形式表达。Western blot鉴定结果显示明显的特异性蛋白印迹带（图5B）。表明正确表达了BNBD4重组蛋白。2.7 重组蛋白BNBD4的毒性试验
重组蛋白BNBD4对大肠杆菌的毒性试验结果显示，5×107cfu/m L、5×106cfu/m L、5×105cfu/m L、5×104cfu/m L浓度的重组菌菌落均明显少于对照组（图6），表明重组蛋白BNBD4对大肠杆菌BL21(DE3）具有明显的抑制作用。3 讨论
【参考文献】：
期刊论文
[1]蓝狐β-防御素1基因（vBD1）的真核表达及其抑菌活性分析[J]. 铁宇娟,刘陶林,蔡卉,王东阳,刘志平,田丽红. 中国预防兽医学报. 2019(05)
[2]小鼠β防御素4体外对人呼吸道合胞病毒抑制作用研究[J]. 张科,林勇平,刘兴德,胡志伟,牟荣,吴家红,罗语思. 中国病原生物学杂志. 2018(07)
[3]牛源防御素类抗菌肽的生物信息学分析[J]. 张炜,杭柏林,董萌萌,胡斌,徐彦召,张慧辉,胡建和. 现代畜牧兽医. 2018(07)
[4]川芎嗪对LPS致伤奶牛子宫内膜上皮细胞的TLR4和BNBD4 mRNA表达的影响[J]. 王自力,蒋会会,张翥,魏学良,别应堂,张家骅. 中国兽药杂志. 2015(12)
[5]β防御素在牛健康组织和病变组织中的分布[J]. 杨宇琴,王细花,吕悦,程广宇,周向梅. 畜牧与兽医. 2015(12)
[6]人β防御素4对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响[J]. 曹玉红,张静怡,张光运,曹艳华. 西部医学. 2015(05)
[7]荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的差异表达[J]. 程兰玲,曹贵方,温世勇,赵鹏伟,关洪敏,菅瑞珍. 中国畜牧兽医. 2012(06)
[8]鸭β-防御素4cDNA的克隆、表达及其抑菌活性的初步分析[J]. 蔺利娟,韩宗玺,邵昱昊,张可心,刘胜旺,李子瑞,马得莹. 畜牧兽医学报. 2011(09)
[9]重组人β防御素4的原核表达、纯化及抗铜绿假单胞菌活性初探[J]. 甘晓琴,伍素华,罗向东,杨成,吴燕. 第三军医大学学报. 2009(10)
[10]牦牛分类地位研究概述[J]. 李齐发,赵兴波,刘红林,李宁,谢庄. 动物分类学报. 2006(03)
博士论文
[1]牛中性粒细胞β-防御素4和5成熟肽的毕赤酵母表达及其抗分枝杆菌活性研究[D]. 康静静.中国农业大学 2014
硕士论文
[1]鸡β-防御素Gal-4基因的原核表达及重组蛋白抑菌活性检测[D]. 史瑞军.塔里木大学 2019
[2]奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及β-防御素4和5对其抑菌活性研究[D]. 李丽好.河北农业大学 2018
本文编号：3339794
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