伪狂犬病毒沿神经元细胞轴突运输的初步研究

发布时间：2021-08-13 06:31

　　伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）属于α疱疹病毒亚科,具有嗜神经性,能够侵染宿主后在外周神经系统建立潜伏感染,使宿主终生带毒。PRV病毒粒子由内到外分为双链DNA、衣壳、被膜蛋白、囊膜蛋白四层,其中被膜蛋白又分为内层被膜蛋白和外层被膜蛋白,内层被膜蛋白一般与核衣壳连接,外层被膜蛋白一般与膜蛋白的胞浆区相连接。病毒侵入神经元的过程与侵染大多数培养的传代细胞的过程很相似。首先,在外周神经系统的轴突末端病毒的囊膜蛋白与细胞膜融合,然后核衣壳沿着轴突微管逆行运输到细胞体的细胞核。同时内层被膜蛋白（UL36、 UL37）和US3也能随核衣壳逆行运输至细胞核。但是,病毒粒子由神经元细胞体沿轴突顺行运输至轴突远端的机制存在很大争议,一些学者认为病毒在神经元细胞体完成组装形成成熟病毒粒子沿轴突运输至轴突末端释放,另一部分学者认为病毒的核衣壳和囊膜蛋白分别沿轴突运输至轴突末端,然后在轴突末端完成组装释放。最近发现在海马神经元的轴突起始段（axon initial segment, AIS）的胞浆中存在一个由肌动蛋白和锚定蛋白G构成的“分子筛”（the cytoplasmic fi... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表（Abbreviation)
第1章 文章综述
    引言
    1.1 伪狂犬病毒流行病毒学
    1.2 伪狂犬病毒的分子生物学
    1.3 伪狂犬病毒的轴突运输
    1.4 微流体系统
    1.5 神经元分子筛
    1.6 研究的目的和意义
第2章 材料和方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 病毒、细胞、菌种与质粒
        2.1.2 实验仪器及耗材
        2.1.3 酶及主要试剂
        2.1.4 主要溶液及培养基的配制
        2.1.5 抗体
        2.1.6 本研究中所用的寡核苷酸引物
    2.2 试验方法
        2.2.1 中间转移质粒的构建
        2.2.2 重组病毒的构建
        2.2.3 Western blotting
        2.2.4 鸡胚背根神经节(DRG)外植体培养
        2.2.5 鸡胚背根神经节(DRG)细胞的原代培养
        2.2.6 盖玻片或培养皿的包被
        2.2.7 体外培养背根神经节细胞的间接免疫荧光检测
        2.2.8 微流体系统的组装及细胞培养和接毒
        2.2.9 活细胞成像技术
第3章 结果和分析
    3.1 重组示踪病毒的构建与鉴定
        3.1.1 PRV gB-RFP重组示踪病毒的构建
        3.1.2 PRV VP16-EGFP重组示踪病毒的构建
        3.1.3 PRV EGFP-VP1/2重组示踪病毒的构建
        3.1.4 PRV EGFP-VP26重组示踪病毒的构建
    3.2 重组示踪病毒生物学特性分析
        3.2.1 空斑大小比较
        3.2.2 一步法生长曲线
    3.3 DRG神经细胞的原代培养
    3.4 间接免疫荧光
    3.5 小鼠成神经瘤细胞(N2a)的刺激分化
    3.6 原代培养的神经细胞攻毒后活细胞成像
    3.7 微流体系统中原代培养DRG细胞及攻毒后观察
第4章 讨论和结论
    4.1 重组示踪病毒
    4.2 DRG细胞的原代培养
    4.3 PRV的轴突运输
    4.4 微流体系统
    4.5 有关神经元分子筛
    4.6 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]极性蛋白与中枢神经系统发育[J]. 赵婧,屈艺,母得志.  国际病理科学与临床杂志. 2011(04)
[2]猪伪狂犬病的流行病学和防制措施[J]. 李宏民,李克良,姚淑红,刘思当.  兽医导刊. 2010(05)
[3]轴突起始段胞浆屏障与神经元蛋白的极性分布[J]. 宋瑷宏,王冬,陈罡,李玉菊,罗建红,段树民,蒲慕明.  中国基础科学. 2009(03)
[4]伪狂犬病病毒鄂A株TK-/gE-/gI-基因缺失疫苗的安全性和保护力研究[J]. 刘正飞,陈焕春,吴斌,何启盖,秦永辉.  畜牧兽医学报. 2004(01)

硕士论文
[1]伪狂犬病毒Ea株主要衣壳蛋白之间的相互作用研究[D]. 薛念波.华中农业大学 2008



本文编号：3339944