猪δ冠状病毒（PDCoV）N蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

发布时间：2021-08-13 11:12

　　旨在表达和纯化猪δ冠状病毒（PDCoV）N蛋白并制备该蛋白的多克隆抗体。以RT-PCR扩增PDCoV N基因并与表达载体pET-28a构建重组质粒,转化Transetta（DE3）菌株诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白表达,以纯化的N蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot验证兔抗血清特异性,间接ELISA测定抗血清效价。利用间接免疫荧光试验（IFA）、免疫荧光试验（IF）、流式细胞术（FCM）鉴定其诊断应用价值。重组N蛋白为可溶性表达,大小约为44 kD,制备的兔抗N蛋白抗体效价可达1∶204 800。IFA与FCM试验证实该抗体能与PDCoV特异性结合,与PEDV及TGEV无交叉反应,IF试验表明该抗体可用于检测小肠组织中的PDCoV。 

【文章来源】：生物技术通报. 2020,36(08)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

PDCoV N蛋白结构与功能预测

PDCoV重组N蛋白（pET28-N)SDS-PAGE(A）及WB鉴定（B）图

通过IFA测定兔抗N蛋白抗体对PDCoV感染的ST细胞结合情况，结果表明，PDCoV感染ST细胞的细胞浆可观察到特异性的绿色荧光，而在TGEV感染的ST细胞与PEDV感染的Vero细胞上未见荧光，未接毒组也无荧光信号，同时，以TGEV及PEDV特异性抗血清为一抗，可在相应的细胞上观察到特异性的绿色荧光，表明该N蛋白抗体可与PDCoV特异性结合，与TGEV及PEDV无交叉反应（图5）。2.5.2 流式细胞检测

【参考文献】：
期刊论文
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[2]新型H7N9禽流感病毒NA蛋白胞外区片段的生物信息学分析及其多克隆抗体制备[J]. 仇书兴,殷星,苏淑娟,殷俊磊,张家友,刘雪贺,贾坤义,杨晓明.  生物技术通报. 2019(12)
[3]猪热休克蛋白40（Hsp40）的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备[J]. 吕其壮,刘畅,颜秋,陈艳,章烨雯,陈旭健,邓旭.  中国兽医学报. 2019(04)
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本文编号：3340322