猪瘟病毒NS3蛋白与宿主相互作用蛋白的筛选与鉴定

发布时间：2021-08-14 22:56

　　猪瘟（Classical swine fever, CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus, CSFV）引起猪的一种急性、发热、接触性病毒性传染病,具有较高的发病率和死亡率。国际兽疫局（Office International Des Epizooties, OIE）把其规定为为必须上报的A类动物传染病。体外细胞培养的猪瘟病毒增殖滴度不高,但是目前研究倾向认为猪瘟病毒（CSFV）的非结构蛋白NS3是致细胞病变作用（CPE）的关键,细胞内NS3蛋白的量与细胞出现CPE之间存在着相关性,同时猪瘟NS3蛋白可以不需要猪瘟病毒其他蛋白的参与,具有直接造成宿主细胞发生病变的能力,但较低的蛋白存在水平并不能对宿主细胞造成可检测的损伤。NS3是病毒致病性的标志,并且与CSFV对于猪肾细胞（PK-15）的致病性有关。为了阐明CSFV NS3蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用,本实验采用酵母双杂交系统,从CSFV易感的的猪血管内皮细胞（SUVEC）中筛选了与NS3蛋白相互作用的宿主细胞蛋白。获得了以下研究结果：（1）利用RT-PCR技术扩增获得猪瘟病毒NS3基因片段,将其... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

猪痕病毒NS3的RT-PCR扩增Fig.lAmplificationonCSFV-NS3genebyRT-PCR

p GBKT7-NS3的双酶切鉴定n of bait vector p GBKT7-NS3 by double restriction 子质量标准；l:pGBKT7-NS3酶切产物；2:pGBKIOOOO DNA Marker ； M2： DL10000 DL10000 DBKT7-NS3 with Nde I and Sal I ； 2:pGBKT7 vectGBKT7-NS3的毒性和自激活性检测分析报告基因的毒性和自激活性检测fect and Self-activation test of bait vector pGBKT7-N

铺海绵，五层滤纸，用玻璃棒赶走气泡棒赶走气泡，平铺上PVDF膜，再铺上上。转膜2-3 h，在其四周放上冰袋。5%的BSA中常温封闭4 h，蛋白面朝液中夹出剪去边缘，平铺到稀释好的一，放入-2(rC冰箱中保存以后再用，在，加入稀释好的二抗溶液（8mL),摇，放-20度冰箱以后再用。在保鲜盒内放入配制好的DAB显色液中，lOmin

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪外周血单个核细胞cDNA酵母表达文库的构建及与猪瘟病毒E2蛋白相互作用细胞蛋白的筛选[J]. 廖亚金,李素,贺番,何文瑞,董泓,冯烁,孙元,仇华吉.  中国预防兽医学报. 2013(09)
[2]酵母双杂交中诱饵蛋白载体的构建与鉴定方法[J]. 李尧锋,张楠阳,赵永聚.  中国生物工程杂志. 2012(02)
[3]鸡法氏囊B细胞酵母双杂交cDNA文库的构建[J]. 彭建平,刘嘉,谌南辉.  江西农业大学学报. 2009(01)
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本文编号：3343329