人脑心肌炎病毒IgM捕获ELISA方法的建立及初步应用
发布时间：2021-08-17 12:20
脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）是一种能引起急性传染病的人畜共患病原体,主要引起人和动物发生脑炎、心肌炎及心肌周围炎,一般人感染EMCV后,出现呕吐、头疼、发热、精神不振、颈部僵硬等症状,严重的可引起孕妇流产、胎儿畸形或者死亡等,但目前,尚未有较好的早期诊断和防治措施。为此,本研究采用抗人IgM（μ链）抗体捕获人EMCV IgM,建立了IgM ELISA检测方法,为EMCV早期临床诊断提供了技术保证。本研究通过PEG-6000浓缩和密度梯度离心对Vero扩大培养的EMCV进行分离纯化、经热灭活厉,进行辣根过氧化物酶（HRP）标记,初步建立人EMCVIgM捕获ELISA方法,筛选出阴、阳性血清,通过病毒终点法中和试验来验证阴、阳性血清作为质控品；然后对初建的各条件进行优化,并对该法的灵敏度、精密性、特异性和稳定性进行验证；最后应用立的方法对1077份临床样本进行了EMCV IgM检测；用间接ELISA法进行符合验证。结果：EMCV致Vero细胞产生细胞病变（CPE）,TCID50=10-5.75/0.1mL,PCR检测后符合预期H标；扩增EM...
【文章来源】：西北民族大学甘肃省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人IgM^链的基因及表达图
。A> 1 “、I图1.1庶糖密度梯度制备阁Fig 1.1. Sucrose density gradient preparation of plans第二天，缓慢加入浓缩样本液T顶层，4°c, 41000ipm/miii离心4h，按500)iL为一个积分取样，之后紫外分光光度计测定D259nm值。2.2.3 EMGV毒价测定观察已铺的96孔板细胞生长状况，当达到90%左右时，即可接毒。用无血清DMEM稀释EMCV(VR-129B株)备用，用无血清DMEM清洗96孔板3次
图1.2 Vero细胞病变结果(lOx)Fig 1.2 Lesions of african green monkey kidney ceilsA组：空白组;AO、A4、A7分别为在0、4、7天观察结果B组：接毒组:AO、A4、A7分别为在0、4、7天观察结果Group A: Blank group; AO, A4, A7 respectively at 0, 4，7d observationsGroup B: Group b\ poison; AO, A4. A7 respectively at ()? 4. 7<J observations
【参考文献】：
期刊论文
[1]脑心肌炎病毒检测方法研究进展[J]. 张海霞,于国伟,冯玉萍. 动物医学进展. 2012(05)
[2]脑心肌炎病毒及其蛋白结构和功能研究进展[J]. 凡静静,冯若飞,马忠仁. 动物医学进展. 2012(02)
[3]猪脑心肌炎病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 施开创,陈宏备,覃芳芸,李向涛,胡杰,郑喜邦,李军. 中国兽医科学. 2011(09)
[4]小RNA病毒基因组3′非编码区结构与功能研究进展[J]. 娄慧,吕建亮,张永光. 动物医学进展. 2011(04)
[5]猪脑心肌炎病毒GXLC株的分离及其3D基因分子特征的分析[J]. 陈进喜,施开创,黄胜斌,陆文俊,屈素洁,郑敏,李军. 中国畜牧兽医. 2011(01)
[6]河北省猪场脑心肌炎病毒感染的血清学调查[J]. 刘兰亚,陈春花,许玉静,宋勤叶,李潭清. 中国人兽共患病学报. 2010(03)
[7]猪脑心肌炎[J]. 严安毓,陈金闩,王燕. 广东畜牧兽医科技. 2008(03)
[8]规模化猪场脑心肌炎病毒感染的血清学调查[J]. 张家龙,盖新娜,马良,陈艳红,查振林,郭鑫,杨汉春. 中国兽医杂志. 2007(01)
[9]口蹄疫病毒基因组RNA结构与功能研究进展[J]. 张显升,刘在新,赵启祖,谢庆阁. 病毒学报. 2001(04)
本文编号：3347755
【文章来源】：西北民族大学甘肃省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人IgM^链的基因及表达图
。A> 1 “、I图1.1庶糖密度梯度制备阁Fig 1.1. Sucrose density gradient preparation of plans第二天，缓慢加入浓缩样本液T顶层，4°c, 41000ipm/miii离心4h，按500)iL为一个积分取样，之后紫外分光光度计测定D259nm值。2.2.3 EMGV毒价测定观察已铺的96孔板细胞生长状况，当达到90%左右时，即可接毒。用无血清DMEM稀释EMCV(VR-129B株)备用，用无血清DMEM清洗96孔板3次
图1.2 Vero细胞病变结果(lOx)Fig 1.2 Lesions of african green monkey kidney ceilsA组：空白组;AO、A4、A7分别为在0、4、7天观察结果B组：接毒组:AO、A4、A7分别为在0、4、7天观察结果Group A: Blank group; AO, A4, A7 respectively at 0, 4，7d observationsGroup B: Group b\ poison; AO, A4. A7 respectively at ()? 4. 7<J observations
【参考文献】：
期刊论文
[1]脑心肌炎病毒检测方法研究进展[J]. 张海霞,于国伟,冯玉萍. 动物医学进展. 2012(05)
[2]脑心肌炎病毒及其蛋白结构和功能研究进展[J]. 凡静静,冯若飞,马忠仁. 动物医学进展. 2012(02)
[3]猪脑心肌炎病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 施开创,陈宏备,覃芳芸,李向涛,胡杰,郑喜邦,李军. 中国兽医科学. 2011(09)
[4]小RNA病毒基因组3′非编码区结构与功能研究进展[J]. 娄慧,吕建亮,张永光. 动物医学进展. 2011(04)
[5]猪脑心肌炎病毒GXLC株的分离及其3D基因分子特征的分析[J]. 陈进喜,施开创,黄胜斌,陆文俊,屈素洁,郑敏,李军. 中国畜牧兽医. 2011(01)
[6]河北省猪场脑心肌炎病毒感染的血清学调查[J]. 刘兰亚,陈春花,许玉静,宋勤叶,李潭清. 中国人兽共患病学报. 2010(03)
[7]猪脑心肌炎[J]. 严安毓,陈金闩,王燕. 广东畜牧兽医科技. 2008(03)
[8]规模化猪场脑心肌炎病毒感染的血清学调查[J]. 张家龙,盖新娜,马良,陈艳红,查振林,郭鑫,杨汉春. 中国兽医杂志. 2007(01)
[9]口蹄疫病毒基因组RNA结构与功能研究进展[J]. 张显升,刘在新,赵启祖,谢庆阁. 病毒学报. 2001(04)
本文编号：3347755
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