仔猪RBM3重组慢病毒载体的构建、包装和鉴定
发布时间：2021-08-17 16:20
RNA结合基序蛋白3（RNA binding motif protein 3,RBM3）是Danno等于1997年首次在人类胎儿的脑组织中分离鉴定得到的一种富含甘氨酸的冷休克蛋白。RBM3蛋白是一种具有潜在研究价值的多功能蛋白质,它不仅能够在对抗缺氧、寒冷等有害刺激时提升表达量以保护细胞,而且它在预防肿瘤、癌症的发生和肌肉疾病的治疗上都具有开发价值。因此构建能够在细胞内表达的含有RBM3基因的慢病毒表达载体能够为研究RBM3蛋白的生理作用机制及RBM3蛋白在临床上的应用奠定基础。本实验的目的是应用分子生物学手段构建含有仔猪RNA结合基序蛋白3（RBM3）基因的慢病毒表达载体pLenti6/v5-RBM3,通过质粒转染技术让重组的慢病毒质粒进入293T细胞内产毒,用产生的重组慢病毒液感染ST细胞（猪睾丸细胞系）,应用荧光定量PCR方法和Western blot方法从mRNA水平和蛋白水平评价重组慢病毒载体提高RBM3蛋白表达的效果。本研究主要应用生物学手段扩增得到仔猪RBM3基因,然后将其连入入门载体pENTR-11中,应用Gateway技术将RBM3基因平行转移到慢病毒载体pLenti...
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
仔猪脾脏组织总RNA提取结果
RBM3 基因的扩增及连有 RBM3 基因 T 载体的mplification of RBM3 and the evaluation of the T脾脏组织中 RBM3 基因的 RT-PCR 检测结果.2: 检测结果.4: PCR 鉴定的空白对照组. 5: 连接 R结果.6: 酶切鉴定的空白对照组.-PCR result of RBM3 expression in spleen tissue oor containing RBM3. 4: blank group of PCR. 5: thor containing RBM3. 6: blank group of double dig结果如下：GGAAGCTCTTCGTGGGAGGGCTCAACATCAGCAGTTTCAGACCTATTTCTGGCGATCCCGGGGTTTTGGCTTCATTACGAGAGCCATGAATGGAGAGTCTCTGAAGTCGGCCCAGGGAACAAGAAGGAGAGGTGGAGGGGAGCAGGGCTCTGATGTCTACAGATATGGATATGGAAAG
鉴定以重组入门载体 pENTR-RBM3 为模板进行 PCR 反应,鉴定得到 551 bp 的 DNA 片段(图2-3) ，未见非特异性片段。将重组入门载体 pENTR-RBM3 进行双酶切, 得到 2300 bp 和 551bp 的 DNA 片段(图 2-3)。图 2-3 重组载体 pENTR-RBM3 的鉴定结果Fig.2-3 The evaluation of the recombinant vector pENTR-RBM3M: DL 2000 Marker.1: 重组载体 pENTR-RBM3 的 PCR 检测结果.2: PCR 鉴定的空白对照组. 3: 重组载体pENTR-RBM3 的酶切检测结果.4: 酶切鉴定的空白对照组.M: DL 2000 Marker. 1: the PCR result of the recombinant vector pENTR-RBM3. 2: blank group of PCR. 3: thedouble digestion result of the recombinant vector pENTR-RBM3. 4: blank group of double digestion.2.3.5 重组慢病毒载体的鉴定以重组慢病毒载体 pLenti6/v5-RBM3 为模板进行 PCR 反应，鉴定得到 551 bp 的 DNA片段(图 2-4)。 将重组慢病毒载体 pLenti6/v5-RBM3 进行双酶切，得到 8688 bp 和 551 bp 的DNA 片段(图 2-4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]动物冷应激的研究进展[J]. 刘莉莉,初芹,徐青,王雅春. 安徽农业科学. 2012(16)
[2]不同强度冷应激下仔猪淋巴细胞HSP70 mRNA的转录规律[J]. 计红,吴永魁,胡仲明,李士泽,李鹏,杨焕民. 应用与环境生物学报. 2007(04)
[3]哺乳动物冷应激的主要神经内分泌反应[J]. 杨明,李庆芬. 动物学研究. 2002(04)
[4]冷休克蛋白及冷休克反应[J]. 颜振兰,姚淑敏. 聊城师院学报(自然科学版). 2000(03)
[5]环境温度与养猪[J]. 高腾云. 家畜生态. 1995(02)
[6]生产转基因动物的技术现状[J]. 成国祥,左嘉客. 细胞生物学杂志. 1992(03)
本文编号：3348094
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
仔猪脾脏组织总RNA提取结果
RBM3 基因的扩增及连有 RBM3 基因 T 载体的mplification of RBM3 and the evaluation of the T脾脏组织中 RBM3 基因的 RT-PCR 检测结果.2: 检测结果.4: PCR 鉴定的空白对照组. 5: 连接 R结果.6: 酶切鉴定的空白对照组.-PCR result of RBM3 expression in spleen tissue oor containing RBM3. 4: blank group of PCR. 5: thor containing RBM3. 6: blank group of double dig结果如下：GGAAGCTCTTCGTGGGAGGGCTCAACATCAGCAGTTTCAGACCTATTTCTGGCGATCCCGGGGTTTTGGCTTCATTACGAGAGCCATGAATGGAGAGTCTCTGAAGTCGGCCCAGGGAACAAGAAGGAGAGGTGGAGGGGAGCAGGGCTCTGATGTCTACAGATATGGATATGGAAAG
鉴定以重组入门载体 pENTR-RBM3 为模板进行 PCR 反应,鉴定得到 551 bp 的 DNA 片段(图2-3) ，未见非特异性片段。将重组入门载体 pENTR-RBM3 进行双酶切, 得到 2300 bp 和 551bp 的 DNA 片段(图 2-3)。图 2-3 重组载体 pENTR-RBM3 的鉴定结果Fig.2-3 The evaluation of the recombinant vector pENTR-RBM3M: DL 2000 Marker.1: 重组载体 pENTR-RBM3 的 PCR 检测结果.2: PCR 鉴定的空白对照组. 3: 重组载体pENTR-RBM3 的酶切检测结果.4: 酶切鉴定的空白对照组.M: DL 2000 Marker. 1: the PCR result of the recombinant vector pENTR-RBM3. 2: blank group of PCR. 3: thedouble digestion result of the recombinant vector pENTR-RBM3. 4: blank group of double digestion.2.3.5 重组慢病毒载体的鉴定以重组慢病毒载体 pLenti6/v5-RBM3 为模板进行 PCR 反应，鉴定得到 551 bp 的 DNA片段(图 2-4)。 将重组慢病毒载体 pLenti6/v5-RBM3 进行双酶切，得到 8688 bp 和 551 bp 的DNA 片段(图 2-4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]动物冷应激的研究进展[J]. 刘莉莉,初芹,徐青,王雅春. 安徽农业科学. 2012(16)
[2]不同强度冷应激下仔猪淋巴细胞HSP70 mRNA的转录规律[J]. 计红,吴永魁,胡仲明,李士泽,李鹏,杨焕民. 应用与环境生物学报. 2007(04)
[3]哺乳动物冷应激的主要神经内分泌反应[J]. 杨明,李庆芬. 动物学研究. 2002(04)
[4]冷休克蛋白及冷休克反应[J]. 颜振兰,姚淑敏. 聊城师院学报(自然科学版). 2000(03)
[5]环境温度与养猪[J]. 高腾云. 家畜生态. 1995(02)
[6]生产转基因动物的技术现状[J]. 成国祥,左嘉客. 细胞生物学杂志. 1992(03)
本文编号：3348094
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