AvBD6对细菌感染和应激的响应及对cLEAP-2表达的影响

发布时间：2021-08-18 06:48

　　β防御素是一类具有广谱抗菌活性的内源性小分子阳离子抗菌肽。禽类吞噬细胞缺乏氧依赖性杀菌机制,其对细菌的清除更依赖于阳离子抗菌肽。AvBD6是β防御素家族成员之一,是有前景的新型抗生素替代品。目前,关于禽β防御素的定量研究报道较少,而定量研究是深入理解禽β防御素病理生理学意义及临床应用的基础。因此,本研究拟通过建立检测AvBD6的夹心ELISA法,检测不同病理生理状态下血清或组织中AvBD6的浓度；同时,还探讨外源性AvBD6对鸡肝脏分泌抗菌肽（LEAP-2）表达量的影响。主要研究结果如下：1、建立检测AvBD6的夹心ELISA法鼠源包被抗体的免疫原是KLH偶联的AvBD6的B细胞线性表位（PGPCRW-KLH）.兔源检测抗体的免疫原是KLH偶联的AvBD6的N端（SPIHACRYQRGV-KLH）。包被抗体、检测抗体和辣根过氧化酶标记的羊抗兔IgG的最佳工作稀释倍数,分别为2500、2000和10000。在20～320 ng/mL的线性范围内,标准曲线的回归方程为：y=12024x-2583,（其中y为AvBD6合成肽浓度,x为OD450,R2=0.9842）。2、不同病理生理条件下A... 

【文章来源】：安徽农业大学安徽省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩写词表
文献综述
引言
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 主要仪器设备
        1.1.3 主要试剂
        1.1.4 主要试剂配制
    1.2 方法
        1.2.1 AvBD6和LEAP-2免疫原
        1.2.2 捕获抗体制备
        1.2.3 检测抗体制备
        1.2.4 双抗体夹心ELISA方法建立
        1.2.5双抗体夹心ELISA法的优化
        1.2.6 确定其他ELISA实验条件的最佳值
        1.2.7 标准曲线的建立
        1.2.8 感染对AvBD6的影响
        1.2.9 应激对AvBD6的影响
        1.2.10 注射AvBD6对LEAP-2的影响
        1.2.11 数据处理
2 结果与分析
    2.1 检测AvDB6的ELISA法建立
        2.1.1 确定捕获抗体最佳工作稀释度
        2.1.2 确定检测抗体最佳工作稀释度
        2.1.3 确定HRP标记的羊抗兔IgG最佳工作稀释度
        2.1.4 确定其他夹心ELISA实验条件的最佳值
        2.1.5 双抗夹心ELISA标准曲线的建立
    2.2 感染对AvBD6的影响
        2.2.1 口服禽沙门氏菌感染对AvBD6的影响
        2.2.2 肌肉注射大肠杆菌和沙门氏菌感染对AvBD6的影响
    2.3 应激对AvBD6的影响
        2.3.1 冷应激对AvBD6的影响
        2.3.2 ACTH注射对AvBD6的影响
    2.4 注射AvBD6对LEAP-2的影响
        2.4.1 注射AvBD6对血清AvBD6的影响
        2.4.2 注射AvBD6对几种组织中LEAP-2表达的影响
3 讨论
    3.1 AvBD6双抗体夹心ELISA法的建立
    3.2 细菌感染对AvBD6的影响
    3.3 应激对AvBD6的影响
    3.4 外源AvBD6对LEAP-2的影响
4 结论
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]检测HSA-GLP-1融合蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立[J]. 王秋实,刘运龙,张玉民,陈知航,钱爱东,程远国.  生物技术通讯. 2013(05)
[2]免疫组织化学染色技术常见问题的研究与探讨[J]. 何新明,罗颖洁,杨通,莫明聪,林云恩,刘桂红.  中国免疫学杂志. 2011(S1)
[3]防御素的生物学特性及其抗病基因工程[J]. 付蓝宝,于嘉林,刘伟华.  遗传. 2011(05)
[4]不同温度热应激对肉鸡血液生化指标及肉品质的影响[J]. 杨小娇,许静,宗凯,张黎莉,刘国庆.  家禽科学. 2011(03)
[5]检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用[J]. 沈婷,周斌,陈溥言.  畜牧与兽医. 2010(04)
[6]鸡β-防御-素8 cDNA在大肠杆菌中的融合表达[J]. 杨涛,钟瑾,涂健,彭开松,祁克宗.  中国兽医科学. 2009(11)
[7]TLRs与RLRs介导的细胞抗病毒反应信号转导及其调节机制[J]. 张煜,钟波,杨艳,舒红兵.  细胞生物学杂志. 2009(04)
[8]蛋鸡新城疫、H9亚型禽流感和大肠杆菌混合感染的诊治[J]. 刘明生,甘辉群,谭菊,王子轼,徐勇.  中国动物检疫. 2009(07)
[9]重组鸡β-防御素6基因的表达和生物学特性的研究[J]. 韩宗玺,廖文艳,王瑞琴,邵昱昊,马得莹.  中国预防兽医学报. 2009(06)
[10]禽源大肠杆菌和沙门氏菌耐药性研究[J]. 王娟,曲志娜,赵思俊,黄秀梅,龚振华,郑增忍.  中国动物检疫. 2009(05)



本文编号：3349409