新城疫病毒RNA适配体的筛选及活性研究
发布时间：2021-08-18 13:53
新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）属于副黏病毒科，为单股、不分节段、有囊膜的负链RNA病毒。新城疫病毒F48E9株为标准强毒株，于1948年初次在中国分离，是我国特有的基因型。适配体是经指数富集配体系统进化技术（Systematic evolution of ligands byexponential enrichment，SELEX）从体外人工合成的寡核苷酸片段。在诊断治疗检测等方面已显现出了巨甘的潜力，在本研究中，通过对筛选的RNA适配体特殊三维空间结构分析，特异性和亲和性分析，生物甘活性分析从而为抑制新城疫病毒与宿主之间的相互作用机制提供了材料。实验利用体外合成的方式构建了总长度为132bp的随机寡核苷酸文库，其中两端58个固定序列，中间74个随机序列，在鉴定并纯化靶病毒与靶蛋白的基础上，利用硝酸纤维素膜过滤的SELEX方法经过12轮的反复筛选，富集过程，最终获得了针对F48E9株病毒和HN蛋白的富集文库。最后一轮筛选的富集RNA文库连接、转化、克隆测序，经DNAMAN软件对测序结果进行一级结构分析和二级结构预测，选出针对F48E9株病毒的3个优...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SELEX筛选技术路线图
蔗糖梯度离心纯化结果
鉴定结果经过的复合 RT-PCR 扩增后，产物经 1%琼脂糖凝胶电泳鉴定结果如图 1-2 F48E9 株病毒纯化前后血凝试验结果A.F48E9 株病毒尿囊液；B.纯化后 F48E9 株病毒。Fig.1-2 The results of hemagglutination test before and after purification F48E9A. F48E9 allantoic fluid; B. After purification F48E9.
【参考文献】：
期刊论文
[1]HIV-P24核酸适配体的筛选[J]. 张宁,毛爱红,马瑾,廖世奇,张丽琼,王晓清,马君. 基础医学与临床. 2012(09)
[2]结核患者血清IgG抗体适体的制备及特异性鉴定[J]. 柏文娟,胡忠义,刘忠华,杨华,秦莲花. 中国人兽共患病学报. 2011(12)
[3]基于核酸适体的丙肝病毒核心蛋白检测新方法[J]. 张振,赵子龙,徐丽,吴新姣,朱海珍,谭蔚泓,方晓红. 中国科学:化学. 2011(08)
[4]基于G-四联体的纳米探针比色检测铅离子[J]. 莫志宏,高应梅,温志渝,范艳萍. 高等学校化学学报. 2010(11)
[5]Development of HBsAg-Binding Aptamers that bind HepG2.2.15 cells via HBV surface antigen[J]. Jia LIU 1 ,Yan YANG 2** ,Bin HU 1 ,Zhi-yong MA 1 ,Hong-ping HUANG 2 ,Yuan YU 2 , Shen-pei LIU 2 ,Meng-ji LU 3,4 and Dong-liang YANG 1,2 (1.Division of Clinical Immunology,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China;2.Experimental Medicine Center,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China;3.Department of Microbiology, Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China;4.Institute of Virology,Medical School of Duisburg-Essen University,Essen,45122,Germany). Virologica Sinica. 2010(01)
[6]高效薄层层析-病毒覆盖结合法比较细胞表面神经节苷脂与不同动物源性新城疫病毒结合特性[J]. 冯新,宋战昀,韩文瑜,丁壮. 微生物学报. 2010(02)
[7]HIV-1抑制蛋白N-SRCR单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 聂超,刘忠,贺欣,吴稚伟. 医学研究生学报. 2010(01)
[8]鹅源副黏病毒NA-1株反向遗传操作体系的建立[J]. 孙玉章,丁壮,孟柯音,丛彦龙,母连志,王昌庆,李少丽. 中国兽医学报. 2010(01)
[9]结核分枝杆菌ESAT-6抗原适体的筛选与亲和性分析[J]. 马占忠,秦莲花,王玉炯,胡忠义. 中华临床医师杂志(电子版). 2007(05)
[10]利用SELEX技术构建靶向光敏药物[J]. 许川山,Albert WING Nang Leung,杨青,曾霞波. 中国激光医学杂志. 2006(06)
本文编号：3350011
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SELEX筛选技术路线图
蔗糖梯度离心纯化结果
鉴定结果经过的复合 RT-PCR 扩增后，产物经 1%琼脂糖凝胶电泳鉴定结果如图 1-2 F48E9 株病毒纯化前后血凝试验结果A.F48E9 株病毒尿囊液；B.纯化后 F48E9 株病毒。Fig.1-2 The results of hemagglutination test before and after purification F48E9A. F48E9 allantoic fluid; B. After purification F48E9.
【参考文献】：
期刊论文
[1]HIV-P24核酸适配体的筛选[J]. 张宁,毛爱红,马瑾,廖世奇,张丽琼,王晓清,马君. 基础医学与临床. 2012(09)
[2]结核患者血清IgG抗体适体的制备及特异性鉴定[J]. 柏文娟,胡忠义,刘忠华,杨华,秦莲花. 中国人兽共患病学报. 2011(12)
[3]基于核酸适体的丙肝病毒核心蛋白检测新方法[J]. 张振,赵子龙,徐丽,吴新姣,朱海珍,谭蔚泓,方晓红. 中国科学:化学. 2011(08)
[4]基于G-四联体的纳米探针比色检测铅离子[J]. 莫志宏,高应梅,温志渝,范艳萍. 高等学校化学学报. 2010(11)
[5]Development of HBsAg-Binding Aptamers that bind HepG2.2.15 cells via HBV surface antigen[J]. Jia LIU 1 ,Yan YANG 2** ,Bin HU 1 ,Zhi-yong MA 1 ,Hong-ping HUANG 2 ,Yuan YU 2 , Shen-pei LIU 2 ,Meng-ji LU 3,4 and Dong-liang YANG 1,2 (1.Division of Clinical Immunology,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China;2.Experimental Medicine Center,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China;3.Department of Microbiology, Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China;4.Institute of Virology,Medical School of Duisburg-Essen University,Essen,45122,Germany). Virologica Sinica. 2010(01)
[6]高效薄层层析-病毒覆盖结合法比较细胞表面神经节苷脂与不同动物源性新城疫病毒结合特性[J]. 冯新,宋战昀,韩文瑜,丁壮. 微生物学报. 2010(02)
[7]HIV-1抑制蛋白N-SRCR单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 聂超,刘忠,贺欣,吴稚伟. 医学研究生学报. 2010(01)
[8]鹅源副黏病毒NA-1株反向遗传操作体系的建立[J]. 孙玉章,丁壮,孟柯音,丛彦龙,母连志,王昌庆,李少丽. 中国兽医学报. 2010(01)
[9]结核分枝杆菌ESAT-6抗原适体的筛选与亲和性分析[J]. 马占忠,秦莲花,王玉炯,胡忠义. 中华临床医师杂志(电子版). 2007(05)
[10]利用SELEX技术构建靶向光敏药物[J]. 许川山,Albert WING Nang Leung,杨青,曾霞波. 中国激光医学杂志. 2006(06)
本文编号：3350011
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