棉酚诱导小鼠睾丸氧化应激对NF-κB/P53信号通路影响的研究

发布时间：2021-08-19 15:07

　　棉酚是一种从棉籽中提取出来的一种多酚类化合物,由于具有抗炎、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤等作用越来越受人们的重视,同时棉酚也具有毒性作用,特别是生殖毒性,然而近几年对于生殖毒性的研究甚少,因此我们研究了棉酚生殖毒性的分子作用机制。为了探究不同浓度棉酚对小鼠睾丸组织抗氧化酶活性的影响,及对相关凋亡蛋白NF-κB（P65）,P53,Caspase-3表达的影响,旨在进一步了解棉酚的生殖毒性作用机制。本试验将48只7周龄,体重为25.53±1.45 g的成年小鼠随机分成4组,每组12只,分为对照组:CG（1%CMC-Na）、低剂量组:LG（40 mg·kg-1·d-1棉酚）、中剂量组:MG（80 mg·kg-1·d-1棉酚）和高剂量组:HG（120 mg·kg-1·d-1棉酚）,连续灌胃20 d后处死,取睾丸称重并计算脏器指数,睾丸组织SOD、GSH-Px活性及MDA含量采用分光光度法测定,用荧光定量PCR方法分析睾丸组织NF-κB（P65）,P53,Caspase-3 mRNA的表达水平。用western-blot方法分析睾丸组织NF-κB（P65）,P53,Caspase-3蛋白的表达水平。... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

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摘要
英文摘要
1 引言
    1.1 棉酚的性质
    1.2 棉酚的药理作用
        1.2.1 棉酚的抗肿瘤作用
        1.2.2 棉酚的抗病毒作用
        1.2.3 棉酚的抗炎活性
        1.2.4 棉酚的抗寄生虫活性
    1.3 棉酚毒性
        1.3.1 棉酚的生殖毒性
        1.3.2 棉酚的免疫毒性
    1.4 氧化应激作用
        1.4.1 氧化应激概述
        1.4.2 棉酚对氧化应激的作用
    1.5 细胞凋亡
        1.5.1 细胞凋亡概述
        1.5.2 细胞凋亡途径
        1.5.3 细胞凋亡相关蛋白
        1.5.4 棉酚对线粒体能量代谢的影响
    1.6 试验研究的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 试验动物
    2.2 动物分组及处理
    2.3 主要仪器与试剂
        2.3.1 主要仪器及设备
        2.3.2 主要试验试剂及其它
    2.4 试验内容与方法
        2.4.1 动物组织的采集
        2.4.2 组织匀浆的制备
        2.4.3 组织蛋白浓度的测定
        2.4.4 总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性测定
        2.4.5 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性测定
        2.4.6 MDA含量测定
        2.4.7 采用QRT-PCR检测睾丸中NF-κB,P53和Caspase-3 m RNA的表达
        2.4.8 采用western-blot检测睾丸NF-κB,P53和Caspase-3 m RNA水平
    2.5 试验数据的处理与分析
3 结果
    3.1 棉酚对小鼠体重及脏器指数的影响
        3.1.1 棉酚对小鼠体重的影响
        3.1.2 棉酚对小鼠睾丸脏器指数的影响
    3.2 棉酚对小鼠睾丸组织SOD,GSH-PX活性和MDA含量的影响
        3.2.1 棉酚对小鼠睾丸组织SOD活性的影响
        3.2.2 棉酚对小鼠睾丸组织GSH-Px活性的影响
        3.2.3 棉酚对小鼠睾丸组织MDA含量的影响
    3.3 小鼠睾丸组织中NF-ΚB,P53和CASPASE-3 MRNA表达情况
        3.3.1 小鼠睾丸组织总RNA的纯度测定
        3.3.2 不同浓度棉酚对小鼠睾丸组织中NF-κB（P65）mRNA表达的影响
        3.3.3 不同浓度棉酚对小鼠睾丸组织中P53 mRNA表达的影响
        3.3.4 不同浓度棉酚对小鼠睾丸组织中Caspase-3 m RNA表达的影响
    3.4 小鼠睾丸组织中NF-ΚB,P53和CASPASE-3 蛋白表达情况
        3.4.1 睾丸组织中核蛋白NF-κB（P65）表达情况
        3.4.2 睾丸组织中全蛋白NF-κB（P65）表达的影响
        3.4.3 睾丸组织中核蛋白P53表达情况
        3.4.4 睾丸组织中全蛋白P53表达情况
        3.4.5 睾丸组织中蛋白Caspase-3 表达情况
    3.5 睾丸组织中抗氧化酶活性与相关基因MRNA表达的相关性分析
4 讨论
    4.1 棉酚引起小鼠中毒的临床及病理表现
    4.2 棉酚对小鼠体重及脏器指数的影响
    4.3 棉酚对小鼠睾丸组织抗氧化能力的影响
    4.4 棉酚对小鼠睾丸组织中P53,NF-ΚB和CASPASE-3 表达水平的影响
    4.5 对棉酚引起的氧化应激作用和蛋白表达的深入分析
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3351639