猪圆环病毒2型衣壳蛋白优势B细胞表位重组蛋白免疫原性研究

发布时间：2021-08-19 22:55

　　猪圆环病毒2型（PCV-2）衣壳蛋白（Cap）是研制基因工程疫苗和血清抗体检测方法的主要候选抗原。为筛选免疫原性强的Cap抗原表位,将定位在Cap上的6个B细胞线性表位的编码基因序列重新组合,命名为R1234、R1235、R1236、R2345、R2346和R3456,然后克隆至pET32a原核表达载体,转化到大肠埃希菌中进行诱导表达。通过对表达和纯化条件的优化,最终获得6个多抗原表位串联体的重组蛋白。Western blot和间接ELISA结果显示,6组重组表位蛋白均能被PCV-2阳性血清特异性识别,具有良好的反应原性。将其与完整Cap分别免疫Balb/c小鼠,检测免疫后血清中特异性抗体和细胞因子水平以及脾脏淋巴细胞中CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞的比例。结果表明,R2346组合刺激机体产生的特异性抗体和细胞因子IFN-γ、IL-4的水平明显高于其他组,脾脏淋巴细胞中CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞含量与对照组相比显著增加（P<0.05）,说明该重组蛋白能够刺激体液免疫和细胞免疫反应。因此,筛选获... 

【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(03)北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

SDS-PAGE鉴定PCV-2 Cap重组表位蛋白表达结果

IFN-γ由主要由T淋巴细胞和天然杀伤细胞分泌,在细胞的免疫应答方面发挥重要作用;IL-4则由Th2细胞分泌,辅助B细胞产生抗体,参与机体的体液应答反应。检测两者的含量可以反映机体受到抗原刺激后免疫应答水平。本试验通过对免疫后35 d血清中IFN-γ和IL-4检测的结果表明,R2346组诱导产生的2种细胞因子水平显著高于对照组,其他试验组无明显差异(图7)。图3 间接ELISA方法检测PCV-2 Cap重组表位蛋白反应原性

间接ELISA方法检测PCV-2 Cap重组表位蛋白反应原性

【参考文献】：
期刊论文
[1]B细胞表位作图研究进展[J]. 朱睿,李震,董世娟,于瑞嵩,朱于敏.  微生物学通报. 2017(09)
[2]抗人大肠癌双价单链抗体基因的构建及表达[J]. 严丹丹,杨福辉,方瑾.  世界华人消化杂志. 2006(24)



本文编号：3352289