金定鸭FTH1基因的克隆及功能初步鉴定

发布时间：2021-08-20 00:35

　　铁蛋白是在真核生物中储存铁的可溶性组织蛋白,主要由两种亚基构成：重链蛋白与轻链蛋白。重链蛋白上含有亚铁氧化酶活性位点（ferroxidase center）,能参与铁的吸收和释放,是铁蛋白的主要功能元件。重链蛋白由铁蛋白重链多肽1（ferritin heavy chain polypeptide1,FTH1）基因编码,其基因表达在转录水平上和转录后都有调控,而转录后调控是由铁调节蛋白介导的。铁蛋白主要参与铁的代谢和调节,而最新研究发现它也具有许多与铁调节不相关的功能。越来越多的研究发现铁蛋白与疾病密切相关,例如肝炎、糖尿病、肿瘤、白血病等。也有报道表明铁蛋白参与脊椎动物的先天性免疫。本课题组通过抑制性消减杂交技术筛选雏鸭肝炎病毒侵染下的差异表达基因,发现FTH1基因是鸭肝炎病毒感染过程中的关键候选基因之一本研究克隆了金定鸭FTH1基因编码区（CDS区）序列,采用qRT-PCR技术检测了FTH1在不同组织中的表达情况,并分析了感染雏鸭肝炎病毒（DHV-1）后FTH1基因和Caspase-3等凋亡相关基因表达量的变化,旨在找出FTH1基因与DHV-1感染雏鸭的内在联系。为进一步探究鸭中FT... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
符号说明
1 文献综述
    1.1 铁蛋白的研究进展
        1.1.1 铁蛋白的结构
        1.1.2 铁蛋白参与调节铁代谢
        1.1.3 铁蛋白的表达调控
        1.1.4 铁蛋白与疾病的研究现状
    1.2 RNA干扰的研究进展
        1.2.1 RNA干扰的发现
        1.2.2 RNA干扰的作用机制
        1.2.3 RNA干扰的特点
        1.2.4 siRNA的制备
        1.2.5 慢病毒载体介导的RNA干扰
        1.2.6 RNA干扰的应用
    1.3 本研究的目的、意义
2 鸭FTH1基因的克隆及表达的初步分析
    2.1 实验材料及试剂
    2.2 主要试验仪器设备
    2.3 实验方法及步骤
        2.3.1 鸭组织总RNA提取及反转录
        2.3.2 PCR引物的设计及合成
        2.3.3 鸭FTH1基因CDS区的克隆与测序
        2.3.4 序列分析
        2.3.5 鸭FTH1基因组织表达谱分析
        2.3.6 DHV-1感染对FTH1基因表达的影响
        2.3.7 感染DHV-1对组织中凋亡相关基因表达影响
    2.4 结果
        2.4.1 鸭FTH1基因CDS区的克隆
        2.4.2 FTH1基因CDS区序列分析
        2.4.3 FTH1基因组织表达谱分析
        2.4.4 DHV-1感染对FTH1基因表达的影响
        2.4.5 DHV-1感染后组织中凋亡相关基因mRNA的表达变化
    2.5 讨论
        2.5.1 FTH1基因CDS区的克隆及序列分析
        2.5.2 鸭FTH1的组织表达分析
        2.5.3 DHV-1感染对组织中FTH1与凋亡相关基因表达的影响
3 FTH1基因功能初步鉴定
    3.1 实验材料及试剂
    3.2 主要试验仪器设备
    3.3 实验方法及步骤
        3.3.1 pEGFP-C1-FTH1过表达载体的构建及功能初步分析
        3.3.2 pGLVH1/GFP+Puro-FTH1干扰载体的构建及功能初步分析
    3.4 结果
        3.4.1 pEGFP-C1-FTH1重组质粒的双酶切鉴定
        3.4.2 鸭胚成纤维细胞的形态特征
        3.4.3 荧光显微镜下重组质粒在DEF中的表达
        3.4.4 荧光定量检测相关基因的表达变化
        3.4.5 荧光显微镜下慢病毒载体在DEF中的表达
        3.4.6 干扰质粒的筛选
        3.4.7 FTH1抑制后凋亡相关基因的表达变化
    3.5 讨论
        3.5.1 pEGFP-C1-FTH1过表达载体的构建及鉴定
        3.5.2 RNAi载体的构建及干扰效果的鉴定
        3.5.3 过表达或干扰FTH1后对凋亡相关基因表达的影响
4 全文结论
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间发表的文章


【参考文献】：
期刊论文
[1]雏鸭肝炎病毒侵染下肝脏消减cDNA文库的构建及差异基因筛选[J]. 李秀,徐琪,张扬,毕瑜林,赵荣雪,陈昌义,段修军,陈国宏.  畜牧兽医学报. 2012(02)
[2]FTH1真核表达载体的构建与鉴定[J]. 董晓,何淑雅,李斌元,王三虎,自映萍,马云.  中南医学科学杂志. 2011(05)
[3]血清铁蛋白检测在病毒性肝炎中的意义[J]. 朱红,侯为顺,汪长生,许慧阳.  皖南医学院学报. 2009(06)
[4]铁蛋白在慢性肝病和肝癌中表达情况的研究进展[J]. 屈锐,刘锐,谢云波,申丽娟.  医学综述. 2009(23)
[5]血清铁和血清铁蛋白检测在肝脏疾病中的应用[J]. 孔德华.  淮海医药. 2009(02)
[6]乙型肝炎肝硬化患者血清铁和铁蛋白水平与脂质过氧化损伤的相关性研究[J]. 李强,陈明,汪莉萍,潘修成,李智勇.  实用肝脏病杂志. 2009(01)
[7]血清铁蛋白与2型糖尿病关系的研究[J]. 韩立坤,卢丹.  中国实验诊断学. 2007(10)
[8]甲胎蛋白与血清铁蛋白联合检测在慢性乙型重症肝炎中的临床意义[J]. 冯红萍.  现代诊断与治疗. 2007(04)
[9]血清铁蛋白测定在肝损伤中的临床意义[J]. 夏吉荣.  重庆医科大学学报. 2003(06)
[10]鸭肝炎病毒诱导雏鸭细胞凋亡的研究[J]. 陈志胜,王丙云,潘忠雄,蔡巧奕,顾万军.  中国兽医学报. 2003(02)

硕士论文
[1]DHV-1感染过程中凋亡相关基因的表达[D]. 盛晓丹.华中农业大学 2012



本文编号：3352451