鸭瘟病毒核糖核苷酸还原酶小亚基（R2）基因原核表达及其转录和表达时相分析

发布时间：2021-08-21 01:07

　　鸭瘟（Duck plague, DP）是由鸭瘟病毒（Duck plague virus, DPV）（疱疹病毒中的一员）引起鸭、鹅和其他雁形目禽类的一种急性、热性、败血性传染病。本研究对四川农业大学禽病防治中心注册的DPV-CHv株核糖核苷酸还原酶小亚基（the small subunit of ribonucleotide reductase, R2）基因（GenBank登录号：EU071039）进行了生物信息学分析、重组蛋白表达及多克隆抗体制备和转录及表达时相分析,结果如下：1DPV R2基因生物信息学分析。通过对DPV R2基因进行生物信息学分析,结果表明该基因编码的蛋白是由355个氨基酸组成的不稳定的偏酸性的水溶性蛋白,相对分子量约为40.68kDa。还发现该蛋白含有19个磷酸化位点和7个糖基化位点,没有信号肽切割位点,有跨膜区,且该蛋白主要定位于细胞质和细胞核。另外,通过对DPV R2蛋白氨基酸序列与其它疱疹病毒R2蛋白氨基酸序列相似性和系统进化关系析表明,DPV与Alphaherpesvirinae亚科中Mardivirus属的疱疹病毒有很高的同源性。2DPV R2重组蛋白表... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 引言
    第一章 文献综述和试验目的
        1 文献综述
            1.1 疱疹病毒R2基因及其编码蛋白
                1.1.1 疱疹病毒R2基因
                1.1.2 疱疹病毒R2蛋白
            1.2 鸭瘟病毒
        2 实验目的
第二部分 试验
    第二章 鸭瘟病毒R2基因生物信息学分析
        1 材料
        2 方法
        3 结果
            3.1 DPV R2基因所编码的氨基酸序列序列相似性比较及进化关系分析
            3.2 DPV R2蛋白的理化性质分析
            3.3 DPV R2蛋白的结构功能分析
            3.4 DPV R2蛋白的亚细胞定位分析
            3.5 DPV R2蛋白的二级结构分析
        4 讨论
    第三章 鸭瘟病毒R2重组蛋白表达及多克隆抗体制备
        1 材料
            1.1 毒株、载体、菌株、鸭胚和动物
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器设备
        2 方法
            2.1 引物合成
            2.2 扩增鸭瘟病毒R2基因
                2.2.1 鸭瘟病毒DNA提取
                2.2.2 扩增鸭瘟病毒R2基因
            2.3 构建及鉴定pMD20-T/R2克隆载体
                2.3.1 构建pMD20-T/R2克隆载体
                2.3.2 鉴定pMD20-T/R2克隆载体
            2.4 构建及鉴定pET32a/R2表达载体
                2.4.1 构建pET32a/R2表达载体
                2.4.2 鉴定pET32a/R2表达载体
            2.5 表达及纯化DPV R2重组蛋白
                2.5.1 转化pET32a/R2表达载体
                2.5.2 表达重组蛋白DPV R2
                2.5.3 检测重组蛋白DPV R2的反应原性
                2.5.4 纯化重组蛋白DPV R2
            2.6 制备及纯化兔抗重组蛋白DPV R2多克隆抗体
                2.6.1 制各兔抗重组蛋白DPV R2多克隆抗体
                2.6.2 纯化兔抗重组蛋白DPV R2多克隆抗体
        3 结果
            3.1 鸭瘟病毒R2基因的扩增
            3.2 克隆载体pMD20-T/R2的鉴定
            3.3 表达载体pET32a/R2的鉴定
            3.4 重组蛋白DPV R2的表达及纯化
            3.5 重组蛋白DPV R2的反应原性检测
            3.6 兔抗重组蛋白DPV R2多克隆抗体效价测定及纯化
        4 讨论
    第四章 鸭瘟病毒R2基因转录及表达时相研究
        1 材料
            1.1 毒株、菌株、抗体和鸭胚
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器设备
        2 方法
            2.1 引物合成
            2.2 鸭瘟病毒R2基因转录类型研究
                2.2.1 细胞培养及鸭瘟病毒RNA提取
                2.2.2 反转录制备cDNA
                2.2.3 普通PCR检测样品
            2.3 鸭瘟病毒R2基因转录时相研究
                2.3.1 实时荧光定量PCR标准曲线制作
                2.3.2 鸭瘟病毒R2基因转录时相研究
            2.4 鸭瘟病毒R2基因表达时相研究
        3 结果
            3.1 药物抑制试验鉴定鸭瘟病毒R2基因转录类型
            3.2 实时荧光定量PCR标准曲线制作
            3.3 鸭瘟病毒R2基因转录时相分析
            3.4 鸭瘟病毒R2基因表达时相分析
        4 讨论
第三部分 结论
第四部分 参考文献
致谢
作者简介及攻读硕士学位期间论文发表



本文编号：3354577