纳米铜对猪肾细胞线粒体凋亡途径的影响

发布时间：2021-08-21 00:45

　　纳米铜作为纳米科技迅猛发展的重要成果,越来越广泛的应用于养殖业、饲料行业等畜牧兽医相关领域。在畜牧业中,铜作为一种促生长剂被广泛的使用,但传统的铜添加剂吸收利用率低,大量铜随粪便排出,污染了土壤环境的同时也造成了极大的浪费。而使用纳米铜作为饲料添加剂可显著提高表观消化率、提高生产性能和机体免疫力。但伴随着纳米铜高利用率和效能而来的生物安全性问题也逐渐凸显出来。研究表明,纳米铜的主要靶器官是肾脏和肝脏,反复经口染毒可引起肾脏和肝脏的损伤；离体实验显示,培养基中添加过量的纳米铜可以诱导细胞形态学的变化和细胞器的损伤,同时纳米铜还可以剂量依赖性的诱导细胞的凋亡,并在此过程中伴随着线粒体膜电位的改变,线粒体膜电位的改变被看成是细胞凋亡线粒体途径（内源性途径）的起始事件,但关于纳米铜与线粒体途径凋亡关系的更进一步研究尚未发现报道。本实验就以猪的肾上皮细胞作为实验材料,进行20、40、60、80μg/mL四种不同剂量纳米铜的染毒处理,通过对猪肾上皮细胞的形态学变化、凋亡率、线粒体膜电位的变化以及细胞内Bid、Bax、Caspase-3和细胞色素C的mRNA表达变化情况的观察,探讨了纳米铜和细胞凋亡... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文词汇縮写表
1 前言
    1.1 纳米材料及纳米铜概述
    1.2 纳米铜在畜牧业上的应用
        1.2.1 纳米铜提高表观消化率与生产性能
        1.2.2 纳米铜的类抗生素作用
        1.2.3 纳米铜对免疫系统的影响
        1.2.4 纳米铜的肝肾毒性
        1.2.5 纳米铜与细胞凋亡
    1.3 细胞的凋亡
        1.3.1 线粒体膜电位与细胞凋亡
        1.3.2 细胞色素C与细胞凋亡
        1.3.3 Caspase家族与细胞凋亡
        1.3.4 Bcl-2家族与细胞凋亡
    1.4 本课题目的意义
2 材料和方法
    2.1 细胞株
    2.2 实验试剂
    2.3 实验仪器和设备
    2.4 溶液配制
    2.5 细胞的培养
    2.6 细胞的冻存与复苏
    2.7 细胞的爬片及HE染色
    2.8 细胞的AO/EB染色
    2.9 Annexin-V FITC/PI双染法检测细胞凋亡
    2.10 JC法检测线粒体膜电位
    2.11 实时荧光定量PCR检测
        2.11.1 细胞的分组与处理
        2.11.2 总RNA的提取
        2.11.3 总RNA的纯度检测
        2.11.4 反转录
        2.11.5 引物的设计及PCR
        2.11.6 荧光定量PCR
    2.12 实验数据分析与统计
3 结果与分析
    3.1 PK-15猪肾细胞的培养
    3.2 细胞AO/EB染色
    3.3 流式细胞仪检测细胞凋亡的比率
    3.4 纳米铜对细胞线粒体膜电位的影响
    3.5 RNA质量检测
    3.6 纳米铜对Bax基因表达的影响
    3.7 纳米铜对Bid基因表达的影响
    3.8 纳米铜对Caspase-3基因表达的影响
    3.9 纳米铜对CYCS基因表达的影响
4 讨论
    4.1 纳米铜诱导细胞凋亡
    4.2 纳米铜与线粒体
    4.3 纳米铜对线粒体途径的影响
        4.3.1 纳米铜对Bid、Bax基因mRNA表达的影响
        4.3.2 纳米铜对细胞色素C mRNA表达的影响
        4.3.3 纳米铜对Caspase-3 mRNA基因表达影响
5 小结
参考文献
致谢



本文编号：3354540