乙型脑炎病毒非结构蛋白NS5与宿主蛋白相互作用的研究

发布时间：2021-08-21 06:55

　　乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）属于黄病毒科黄病毒属,是一种危害严重的人兽共患虫媒性传染病病原,感染人和动物后可以引起乙型脑炎（简称乙脑）。该病是人类中枢神经系统最常见的虫媒病之一,对人类健康造成巨大威胁,同时乙脑也是危害我国养猪业的重大疫病之一。JEV感染引起机体中枢神经系统过度炎症反应是其致病的主要原因,但目前,具体的致病机制尚不太清楚。近年研究表明,JEV蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用对病毒入侵、复制、神经毒力、神经炎症反应、天然免疫逃逸及诱导宿主保护性免疫等方面可产生重要影响。JEV非结构蛋白NS5具有甲基转移酶和RNA依赖的RNA聚合酶活性,在病毒基因组的复制以及病毒的致病中发挥重要作用。因此,研究JEV NS5蛋白与宿主蛋白相互作用对于揭示该病毒的复制与致病机理以及抗病毒药物的开发具有重要科学意义。另外,由于JEV致病机制的复杂性,临床中针对该病的有效治疗方法也十分缺乏,因此探索针对乙脑的治疗药物,对该疾病的临床防治具有重要意义。本论文主要围绕JEV NS5蛋白与宿主蛋白相互作用对病毒复制、病毒逃避宿主抗病毒反应的影响,以及药物... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表(Abbreviation)
第1章 文献综述
    1.1 乙型脑炎病毒简介
    1.2 乙型脑炎的流行病学特性
        1.2.1 乙型脑炎的流行特征
        1.2.2 乙型脑炎的传播特征
    1.3 乙型脑炎的致病机制
        1.3.1 JEV在机体内的增殖与扩散
        1.3.2 JEV引起神经炎症反应的分子机制
    1.4 乙型脑炎病毒的分子生物学特性
        1.4.1 基因组结构与功能
        1.4.2 蛋白质功能
        1.4.3 病毒的入侵和复制过程
    1.5 乙型脑炎临床症状与病理变化
        1.5.1 乙型脑炎的临床症状
        1.5.2 乙型脑炎的病理变化
    1.6 乙型脑炎的防治
    1.7 乙脑病毒蛋白与宿主蛋白相互作用的研究进展
        1.7.1 JEV蛋白与宿主蛋白的相互作用对病毒入侵的影响
        1.7.2 JEV蛋白与宿主蛋白的相互作用对病毒复制的影响
        1.7.3 JEV蛋白与宿主蛋白的相互作用对神经炎症反应的影响
        1.7.4 JEV蛋白与宿主蛋白的相互作用对天然免疫的影响
    1.8 病毒蛋白与宿主蛋白相互作用的研究方法
        1.8.1 酵母双杂交系统
        1.8.2 串联亲和纯化(TAP)
第2章 乙型脑炎病毒NS5蛋白与HSP70相互作用的研究
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 实验方法
    2.3 结果与分析
        2.3.1 利用串联亲和纯化与质谱分析结合法筛选与JEV NS5蛋白相互作用的宿主蛋白
        2.3.2 JEV NS5与宿主蛋白相互作用的验证
        2.3.3 HSP70蛋白可以与JEV NS5的RdRp结构域直接相互作用
        2.3.4 HSP70与JEV复制复合体组成成分相互作用
        2.3.5 HSP70正调控JEV基因组的复制
        2.3.6 HSP70可稳定JEV复制复合体的组成成分
        2.3.7 JEV感染刺激HSP70蛋白的表达
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 JEV NS5蛋白抑制宿主蛋白入核运输的研究
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 实验方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 JEV抑制含经典NLS的报告蛋白入核
        3.3.2 JEV NS5蛋白抑制3×SV40NLS-2×EGFP的入核
        3.3.3 JEV NS5与核运输蛋白KPNA2、KPNA3、KPNA4相互作用
        3.3.4 JEV NS5抑制p50与p65的核定位
        3.3.5 JEV NS5抑制NF-κB的活性
        3.3.6 JEV NS5通过直接靶向p50/p65来抑制NF-κB的活性
        3.3.7 JEV NS5抑制p50/p65与KPNA3、KPNA4的相互作用
        3.3.8 JEV NS5通过靶向KPNA2、KPNA3、KPNA4抑制Ⅰ型干扰素的分泌
        3.3.9 KPNA2、KPNA3、KPNA4的过表达抑制JEV的复制
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 依那西普对乙型脑炎的治疗作用的研究
    4.1 前言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验方法
    4.3 结果与分析
        4.3.1 依那西普降低JEV感染神经元/胶质细胞引起的炎症反应
        4.3.2 依那西普减轻JEV感染小鼠脑组织的病理症状
        4.3.3 依那西普降低JEV感染小鼠脑部炎症因子的分泌
        4.3.4 依那西普对JEV感染小鼠脑组织中胶质细胞和神经元形态和数量的影响
        4.3.5 依那西普减少JEV感染小鼠脑组织中神经元的凋亡
        4.3.6 依那西普抑制JEV感染引起的炎症与凋亡信号通路的激活
        4.3.7 依那西普可缓解JEV感染所引起的血脑屏障通透性的改变
        4.3.8 依那西普可降低小鼠脑组织中的病毒载量
        4.3.9 依那西普可减轻JEV感染小鼠的临床症状并降低其致死率
    4.4 讨论
    4.5 小结
结论
参考文献
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[2]猪流行性乙型脑炎及防治[J]. 林太明,李圣元.  畜禽业. 2008(09)
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[4]乙型脑炎病毒研究进展[J]. 赵荣乐,郑光宇.  生物学通报. 2007(07)
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[6]分子生物学方法在登革热研究中的新进展[J]. 翁育伟.  中国人兽共患病杂志. 2001(06)
[7]乙型脑炎研究进展[J]. 马士恒,陈宇萍,王占国.  中国人兽共患病杂志. 2001(01)
[8]成人重型乙脑非典型发病1例报告[J]. 王子周.  中国人兽共患病杂志. 2000(06)
[9]纳络酮治疗乙型脑炎的临床研究[J]. 姚文虎,林厚基,赵红,王家猛,范春蕾,周镇先.  江苏医药. 2000(06)
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博士论文
[1]猪源乙型脑炎病毒SXBJ07株全长基因组克隆分析及ELISA检测方法的建立[D]. 王（韦华）.西北农林科技大学 2009



本文编号：3355109