十二指肠贾第虫ELISA、巢式PCR和LAMP诊断方法的建立
发布时间：2021-08-22 02:07
贾第虫病是由寄生于人畜肠道的十二指肠贾第虫（Giardia duodenalis）简称贾第虫引起的原虫性人畜共患病,该病呈全球性流行,是一种严重危害人类健康的寄生虫病。贾第虫具有极高的感染性,能够导致水源性暴发流行,人感染贾第虫后临床表现主要为腹泻,目前对于贾第虫病的防治工作越来越深入。贾第素（giardin）是贾第虫一种独有的细胞骨架成分,目前将贾第素分为4类:α-giardin、β-giardin、δ-giardin和γ-giardin,其中贾第虫γ-giardin作为贾第虫特异性蛋白,且具有免疫原性,所以本研究选择贾第虫γ-giardin作为抗原建立贾第虫病诊断方法,旨在将γ-giardin作为贾第虫病免疫预防和诊断的重要依据。本研究中利用制备保存的γ-giardin重组蛋白表达菌进行表达纯化,并对表达纯化的条件进行优化,用所得的γ-giardin蛋白对BALB/c小鼠进行免疫制备多克隆抗体。用γ-giardin蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法,同时优化ELISA过程条件。用此法对隐孢子虫、微孢子虫和毛滴虫阳性血清检测进行特异性实验,并对50份采集的血清样品进行检测。...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组蛋白可溶性分析
M：预染的蛋白质分子质量标准；1：γ-贾第素重组蛋tein Marker; 1: The supernatant of recombinant protern γ图 3-4 重组蛋白的 SDS-PAGE 分析Fig. 3-4 SDS-PAGE analysis of recombinant pro-贾第素蛋白的蛋白定量用 BCA 法进行定量测定，检测结果，重组蛋间接 ELISA 检测方法建立度与血清稀释度的确定当 γ-贾第素抗原的包被浓度为 200 ng/孔，血清的81，P/N 值最大为 31.284。因此，γ-贾第素抗原 1:25600（表 3-1）。
M：DL2000 DNA Maker；1：第一轮 PCR 产物；2：第二轮产物M：DL2000 DNA Maker；图 3-5 PCR 引物验证Fig.3-5 PCR primer verification巢式 PCR 反应退火温度优化、55.5 ℃、56 ℃、57 ℃、58.2 ℃、60 ℃、63 ℃和 64 ℃R 在退火温度为 56 ℃时条带亮度最为明显，故第一轮 PC-6）。第二轮 PCR 在退火温度为 57 ℃时条带亮度最为明7 ℃（图 3-7）。
本文编号：3356782
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组蛋白可溶性分析
M：预染的蛋白质分子质量标准；1：γ-贾第素重组蛋tein Marker; 1: The supernatant of recombinant protern γ图 3-4 重组蛋白的 SDS-PAGE 分析Fig. 3-4 SDS-PAGE analysis of recombinant pro-贾第素蛋白的蛋白定量用 BCA 法进行定量测定，检测结果，重组蛋间接 ELISA 检测方法建立度与血清稀释度的确定当 γ-贾第素抗原的包被浓度为 200 ng/孔，血清的81，P/N 值最大为 31.284。因此，γ-贾第素抗原 1:25600（表 3-1）。
M：DL2000 DNA Maker；1：第一轮 PCR 产物；2：第二轮产物M：DL2000 DNA Maker；图 3-5 PCR 引物验证Fig.3-5 PCR primer verification巢式 PCR 反应退火温度优化、55.5 ℃、56 ℃、57 ℃、58.2 ℃、60 ℃、63 ℃和 64 ℃R 在退火温度为 56 ℃时条带亮度最为明显，故第一轮 PC-6）。第二轮 PCR 在退火温度为 57 ℃时条带亮度最为明7 ℃（图 3-7）。
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